目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)对锰中毒大鼠神经损伤的干预效应及其机制.方法:成年雄性SD大鼠60只,随机分为5组,每组12只.(1)空白对照组:通过腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)给予0.9％(质量分数)生理盐水,并通过灌胃(intragastric,ig)给予双蒸水(double distilled water,ddH2O);(2)锰中毒模型组:ip给予MnCl2 15 mg/kg(Mn2+6.48 mg/kg),ig给予ddH2O;(3)单独姜黄素组:ip给予0.9％生理盐水,ig给予CUR 300 mg/kg;(4)MnCl2+CUR1 组:ip 给予 MnCl2 15 mg/kg,ig 给予 CUR 100 mg/kg;(5)MnCl2+CUR2 组:ip 给予 MnCl215mg/kg,ig给予CUR300 mg/kg).5组大鼠每周给药5 d,连续给予4周.旷场实验、转棒实验检测动物的探索行为、焦虑抑郁状态、运动及平衡能力,Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)实验检测动物的学习、记忆能力.每组6只大鼠进行脑纹状体HE染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检查,并且其中2只大鼠一侧纹状体进行透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察.每组另外6只大鼠的一侧纹状体利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定锰含量,另一侧纹状体用免疫印迹(Western blotting,WB)检测α-突触核蛋白(α-Synucle-in,α-Syn)、细胞质和细胞核转录因子 EB(trαnscription factor EB,TFEB)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapa-mycin,mTOR)、p-mTOR、Beclin1、P62 和微管相关蛋白轻链蛋白 3(microtubule-associated protein light chain-3,LC3)表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transterase-mediated dUTP nick end labeling;TUNEL)检测大鼠纹状体多巴胺能神经元凋亡.结果:旷场和转棒实验中,锰中毒模型组水平运动距离、直立次数、中央区运动时间和运动距离、在棒时间、在棒圈数较空白对照组显著降低(P＜0.05),而MnCl2+CUR2组的上述指标均较锰中毒模型组显著增加(P＜0.05).MWM定位航行实验第3、4天时,锰中毒模型组逃避潜伏期和游泳距离显著高于空白对照组,而MnCl2+CUR2组则显著高于锰中毒模型组(P＜0.05).MWM探索实验中,锰中毒模型组大鼠穿越平台次数、目标象限游泳时间、目标象限游泳时间百分比、目标象限距离及目标象限距离百分比显著低于对照组(P＜0.05),而MnCl2+CUR2组大鼠这些指标均较锰中毒模型组显著增加(P＜0.05).脑纹状体IHC和HE染色发现,锰中毒模型大鼠脑纹状体中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性多巴胺能神经细胞显著减少,嗜酸性细胞数量显著增加,MnCl2+CUR1和MnCl2+CUR2组TH阳性细胞显著增加,嗜酸性细胞减少,TEM观察发现,锰中毒模型组纹状体神经细胞出现染色质凝结,核固缩;线粒体水肿或空泡,可见溶酶体以及自噬泡.MnCl2+CUR2组染色质凝结,核固缩,线粒体水肿、空泡等均较锰中毒大鼠明显改善,并可见更多的溶酶体以及自噬泡.免疫印迹检测发现,锰中毒模型组α-Syn表达水平较空白对照组显著增加,而MnCl2+CUR2组聚集性α-Syn表达则较锰中毒模型组显著减少(P＜0.05).TFEB及自噬相关蛋白免疫印迹检测发现,与空白对照组比较,单独CUR组、锰中毒模型组、MnCl2+CUR1和MnCl2+CUR2组纹状体胞核TFEB表达均显著增加(P＜0.05),与锰中毒模型组比较,MnCl2+CUR1和MnCl2+CUR2组其表达均显著增加(P＜0.05);与空白对照组比较,各组mTOR、p-mTOR、P62蛋白表达水平显著降低,Beclinl、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ表达水平则显著增加(P＜0.05);与锰中毒模型组相比,MnCl2+CUR1和MnCl2+CUR2组大鼠脑纹状体中mTOR、p-mTOR及P62蛋白表达水平显著降低,Beclinl、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ表达水平显著增加(P＜0.05).纹状体TUNEL检测结果发现,与空白对照组比较,锰中毒模型组和MnCl2+CUR1组TUNEL阳性细胞显著增加(P＜0.05);而与锰中毒模型组相比,MnCl2+CUR2组TUNEL阳性细胞则显著降低(P＜0.05).结论:一定剂量的姜黄素干预可以减轻锰中毒大鼠纹状体多巴胺能神经元损伤,改善锰中毒大鼠的神经行为症状,减少α-Syn聚集,减少细胞凋亡,其可能的机制是通过促进TFEB核转位增强细胞自噬.

锰中毒;姜黄素;转录因子EB;自噬

来丽叶;窦长松;智翠娜;陈洁;马雪;赵鹏;姚碧云

北京大学公共卫生学院毒理学系,食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室,北京 100191

北京大学学报（医学版）

[1]来丽叶;窦长松;智翠娜;陈洁;马雪;赵鹏;姚碧云-.姜黄素干预通过促进自噬改善氯化锰所致的大鼠神经行为损伤)[J].北京大学学报（医学版）,2022(03):400-411

Mn2+6,MnCl2+CUR1,MnCl2+CUR2,MnCl215mg,CUR300,Synucle,nscription,transterase

姜黄素,氯化锰,神经行为,curcumin,锰中毒,神经损伤,干预效应,空白对照,腹腔注射,intraperitoneal,injection,生理盐水,灌胃,intragastric,双蒸水,double,distilled,water,ddH2O,旷场实验,转棒实验,实验检测,探索行为,焦虑抑郁状态,平衡能力,Morris,水迷宫,maze,MWM,记忆能力,纹状体,HE,免疫组织化学,immunohistochemistry,IHC,透射电镜,transmission,electron,microscope,TEM,电感耦合等离子体质谱,ICP,锰含量,另一侧,体用,blotting,WB,突触核蛋白,细胞质,细胞核,核转录因子,TFEB,雷帕霉素靶蛋白,mammalian,target,rapa,mycin,mTOR,Beclin1,P62,微管,轻链,microtubule,associated,protein,light,chain,LC3,脱氧核糖,转移酶,末端标记,标记法,terminal,deoxynucleotidyl,mediated,dUTP,nick,end,labeling,TUNEL,多巴胺能神经元凋亡,水平运动,运动距离,直立,中央区,区运,运动时间,航行,天时,逃避潜伏期,台次,象限,游泳时间,模型大鼠,酪氨酸羟化酶,tyrosine,hydroxylase,TH,神经细胞,嗜酸性细胞,细胞数量,阳性细胞,观察发现,染色质,核固缩,空泡,溶酶体,聚集性,自噬相关蛋白,蛋白免疫印迹,蛋白表达水平,Beclinl,神经元损伤,行为症状,核转位,细胞自噬

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