典型文献
用于筛选脑出血相关基因的斑马鱼模型的构建
文献摘要：
目的:构建斑马鱼脑出血模型，并以此筛选诱导斑马鱼脑出血的相关基因。方法:通过吗啉代寡核苷酸（MO）技术和单细胞显微注射技术构建斑马鱼脑出血模型，并从宏观、微观角度多重验证。首先，造模实验采用注射Control MO的正常野生型AB品系斑马鱼作为对照组，实验组在AB斑马鱼胚胎单细胞时期分别注射神经嵴源性细胞（NCDCs）发育相关基因的MO，包括col8a1 MO、tfap2α MO、msx1a MO、msx2 MO、dkk1a MO等，于显微镜白光视野下初步验证模型。其次，采用Tg（flk1：GFP；gata1：dsRed）双转基因斑马鱼进行模型验证，该转基因鱼用绿色荧光蛋白（GFP）标记血管内皮细胞，用红色荧光蛋白（dsRed）标记血红细胞，能够更清晰地观察到斑马鱼脑出血的部位。在斑马鱼胚胎单细胞时期注射Control MO 作为对照组，注射col8a1 MO作为实验组，正常培养至受精后48 h通过激光共聚焦观察红细胞渗漏情况，构建荧光视野可观察的脑出血模型。最后，采用Tg（flk1：GFP）转基因斑马鱼进行基于血脑屏障的模型验证，通过Dextran-Rhodamin和DAPI染料的渗漏现象进一步明确斑马鱼血脑屏障的破坏与脑出血的发生，并进行定量统计，从而验证NCDCs发育相关基因与脑出血表型的关系，证明造模有效。结果:与注射Control MO的正常野生型AB品系斑马鱼对照组相比，col8a1、tfap2α和msx1基因突变的实验组斑马鱼有明显的脑出血现象，出血比例分别为18.18%（52/286）、23.04%（62/251）、35.94%（23/64），而msx2和dkk1a基因突变的斑马鱼极少观察到脑出血，出血比例仅分别为1.03%（1/97）和1.15%（1/87）。注射Control MO与col8a1 MO的Tg（flk1：GFP；gata1：dsRed）双转基因斑马鱼红细胞渗漏发生率分别为0.37%（1/273）与18.18%（52/286）（
P<0.001）。注射Control MO与col8a1 MO组Tg（flk1：GFP）转基因斑马鱼DAPI阳性的细胞核数分别为（10.05±5.27）个与（60.35±3.96）个（
P<0.001）；Dextran-Rhodamin染料渗漏引起的中脑实质荧光示踪强度值分别为2.54±4.70与5.13±3.52（
P<0.001），两组比较差异有统计学意义。
结论:本研究成功构建了斑马鱼脑出血模型，并筛选出col8a1、tfap2α、msx1等诱导斑马鱼脑出血的相关基因。
文献关键词：
脑出血;斑马鱼;血脑屏障;渗漏;基因
中图分类号：
作者姓名：
闫思宇;张秀茹;张仁杰;马潞;李浩;贺民;伍聪;肖安琪;游潮;刘翼;王业启;田蕊
作者机构：
四川大学华西医院神经外科，成都 610041;重庆大学生物工程学院，重庆400030
文献出处：
引用格式：
[1]闫思宇;张秀茹;张仁杰;马潞;李浩;贺民;伍聪;肖安琪;游潮;刘翼;王业启;田蕊-.用于筛选脑出血相关基因的斑马鱼模型的构建)[J].中华医学杂志,2022(33):2619-2623
A类：
NCDCs,col8a1,tfap2,msx1a,msx2,dkk1a,flk1,gata1,dsRed,Rhodamin,msx1
B类：
脑出血,斑马鱼模型,吗啉,寡核苷酸,MO,单细胞,显微注射,注射技术,技术构建,Control,野生型,AB,品系,斑马鱼胚胎,神经嵴,白光,验证模型,Tg,GFP,双转基因,转基因斑马鱼,模型验证,绿色荧光蛋白,血管内皮细胞,红色荧光蛋白,受精,共聚,血脑屏障,Dextran,DAPI,染料,渗漏现象,定量统计,基因突变,极少,细胞核,核数,中脑,脑实质,荧光示踪
AB值：
0.161016
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