典型文献
靶向肿瘤细胞PD-L1的shRNA慢病毒干扰载体的构建
文献摘要：
目的:利用RNAi技术构建靶向抑制肿瘤细胞PD-L1表达的shRNA慢病毒干扰载体,用于解除肿瘤细胞的免疫逃逸机制.方法:利用Designer3.0(Genepharma)软件以PD-L1为靶点设计4种shRNA基因序列,将shRNA序列插入到慢病毒载体中,连接产物转化后在选择性培养基上筛选阳性菌落并提取重组质粒,进行双酶切及测序鉴定,荧光显微镜观察慢病毒转染效果,western blot对目的基因PD-L1四个靶点筛选获得PD-L1蛋白表达并计算出重组慢病毒的干扰效率.结果:限制性核酸内切酶Xba I和Nhe I双切鉴定结果皆为1000 bp大小的阳性重组载体;测序结果与shRNA模版一致;荧光显微镜观察结果显示慢病毒转染效果较好;western blot结果显示SH1、SH4组PD-L1表达无抑制,SH2、SH3组PD-L1表达有抑制;SH1组干扰效率19.75％,SH2组干扰效率32.10％,SH3组干扰效率40.74％,SH4组干扰效率7.41％.讨论:SH3组重组慢病毒对PD-L1表达有抑制作用且干扰效率最高,成功构建了一款靶向肿瘤细胞PD-L1的shRNA慢病毒干扰载体,为利用RNAi技术干扰PD-L1靶点的肿瘤免疫治疗奠定了实验基础.
文献关键词：
PD-L1基因;RNA干扰;慢病毒载体
中图分类号：
作者姓名：
孙杰;贾裕;贾旭;陈阳;佟莹莹;金微洋;杨光华
作者机构：
上海海洋大学,科技部生物科学国际研究中心,上海 201306;上海海洋大学,国家水生动物病原体收集中心,上海 201306;上海海洋大学,水产动物遗传育种中心,上海 201306;浙江华医健康产业发展有限公司,浙江 杭州 311500
文献出处：
引用格式：
[1]孙杰;贾裕;贾旭;陈阳;佟莹莹;金微洋;杨光华-.靶向肿瘤细胞PD-L1的shRNA慢病毒干扰载体的构建)[J].广东化工,2022(23):36-40
A类：
Designer3,Genepharma
B类：
肿瘤细胞,L1,shRNA,慢病毒干扰,干扰载体,RNAi,技术构建,靶向抑制,免疫逃逸,基因序列,慢病毒载体,选择性培养基,阳性菌,菌落,提取重组,重组质粒,双酶,荧光显微镜观察,慢病毒转染,western,blot,目的基因,靶点筛选,重组慢病毒,限制性,核酸内切酶,Xba,Nhe,bp,重组载体,模版,SH1,SH4,SH2,SH3,肿瘤免疫治疗
AB值：
0.295814
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