目的 为了明确氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱发细胞自噬及姜黄素是否通过抑制自噬对动脉粥样硬化起保护作用.方法 本实验建立ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECS)模型,分2个部分进行.①体外培养HUVECS细胞,用适宜浓度的ox-LDL干预HUVECS细胞,分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+姜黄素组(简称姜黄素组),分别在透射电子显微镜下观察自噬体,用蛋白印迹法分析和反转聚合酶链反应(Rt-PCR)测定检测微管相关蛋白3(LC3)、p62、自噬相关蛋白12和自噬相关蛋白5结合体(Atg12-5)、自噬相关基因(Beclin1)、溶酶体相关膜蛋白(Lamp)1的水平,研究ox-LDL是否诱导HUVECS细胞发生的自噬,姜黄素是否抑制ox-LDL诱导HUVECS细胞发生的自噬.②体外培养HUVECS细胞,用适宜浓度Si-mTOR/雷帕霉素预处理后再加姜黄素处理,分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+姜黄素组(姜黄素组)、ox-LDL+姜黄素+Si-mTOR/雷帕霉素组(简称雷帕霉素组),用Rt-PCR测定哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、LC3、p62、Atg 12-5、Beclin1、Lamp1的水平,检测其下游蛋白表达的水平,研究姜黄素是否通过mTOR通路抑制ox-LDL诱导HUVECS细胞发生自噬.结果 ①在透射电子显微镜下观察对照组、ox-LDL组、姜黄素组3组自噬体情况,对照组胞质内未见明显自噬体,ox-LDL组可见自噬体明显增多,姜黄素组自噬体显著降低;与对照组相比,ox-LDL组LC3、p62、Atg12-5、Beclin1表达显著增加(P<0.01);与ox-LDL组相比,姜黄素组LC3、p62、Atg12-5、Beclin1及Lamp1表达明显降低(P<0.01).由此可见,ox-LDL可诱导细胞自噬及上调LC3、p62、Atg12-5、Beclin1,但姜黄素抑制自噬及上述表达.②用Rt-PCR测定分别测定对照组、ox-LDL组、姜黄素组、雷帕霉素组mTOR、p-mTOR、LC3、p62、Atg12-5、Beclin1、Lamp1的水平,发现与对照组相比,ox-LDL组p-mTOR表达显著降低(P<0.01),LC3、p62、Atg12-5、Beclin1表达显著增加(P<0.01);与ox-LDL组相比,姜黄素组p-mTOR表达增加(P<0.01),LC3、p62、Atg12-5、Beclin1、Lamp1表达显著下降(P<0.01);雷帕霉素组蛋白同ox-LDL组相似.结论 ox-LDL使p-mTOR表达降低及LC3、p62、Atg12-5、Beclin1表达显著增加,姜黄素使p-mTOR表达增加及LC3、p62、Atg12-5、Beclin1表达降低,雷帕霉素可阻断姜黄素的上述作用.由此可知,姜黄素通过激活mTOR通路抑制ox-LDL诱导HUVECS细胞发生自噬;姜黄素可能通过抑制自噬对动脉粥样硬化起保护作用.

姜黄素;自噬;脂蛋白类;LDL;动脉粥样硬化

王海雄;李娜;李军;闫蕊;张冰洲

030024 太原,山西省心血管病医院心内科

山西医药杂志

[1]王海雄;李娜;李军;闫蕊;张冰洲-.姜黄素对氧化低密度脂蛋白胆固醇诱导的人脐静脉内皮细胞自噬的影响)[J].山西医药杂志,2022(19):2176-2181

HUVECS,+Si,Lamp1

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