目的:探讨辅助性T细胞9(Th9)细胞和白细胞介素9(IL-9)在胃癌患者中的水平，评估Th9/IL-9对胃癌患者抗肿瘤免疫应答的调控作用。方法:纳入2018年10月至2019年8月在新乡医学院第一附属医院行手术治疗的胃癌患者34例，同期健康体检者20例。采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)，从手术切除的胃癌组织分离肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)和自体胃癌细胞，分选PBMCs和TILs中的CD4 + T细胞、CD8 + T细胞和CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-9水平，流式细胞术检测PBMCs和TILs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例，实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-9和转录因子富嘌呤核酸结合蛋白1(PU.1) mRNA的相对表达量。以重组人IL-9刺激胃癌患者PBMCs和TILs，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖，Western blot法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)和STAT6磷酸化，ELISA法检测细胞因子分泌。以重组人IL-9刺激胃癌患者TILs分选的CD8 + T细胞，建立CD8 + T细胞与自体胃癌细胞的直接接触与间接接触共培养系统，通过检测乳酸脱氢酶(LDH)水平计算靶细胞死亡比例，ELISA法检测γ-干扰素(γ-IFN)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞、CD8 + T细胞与自体胃癌细胞共培养，加入抗IL-9中和抗体，检测靶细胞死亡比例。 结果:对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例分别为(1.21±0.25)%和(1.14±0.19)%，差异无统计学意义( P＝0.280)。胃癌组TILs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例为(2.30±0.55)%，高于对照组PBMCs和胃癌组PBMCs(均 P<0.001)。对照组和胃癌组血浆IL-9水平分别为(5.04±1.51)ng/ml和(4.93±1.25)ng/ml，差异无统计学意义( P＝0.787)。对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中IL-9 mRNA相对表达量分别为1.33±0.39和1.36±0.27，差异无统计学意义( P＝0.691)。胃癌组TILs中IL-9 mRNA相对表达量为2.90±0.75，高于对照组PBMCs( P<0.001)和胃癌组PBMCs( P<0.001)。对照组和胃癌组PBMCs中PU.1 mRNA相对表达量分别为1.21±0.12和1.20±0.11，差异无统计学意义( t＝0.21， P＝0.833)。胃癌组TILs中PU.1 mRNA相对表达量为2.81±0.65，高于对照组PBMCs( P<0.001)和胃癌组PBMCs( P<0.001)。重组人IL-9对胃癌患者PBMCs和TILs的增殖无明显影响(均 P>0.05)，但可提高STAT6的磷酸化水平，促进TILs分泌γ-IFN、IL-17和IL-22(均 P<0.05)。在直接接触共培养系统中，IL-9刺激使肿瘤浸润性CD8 + T细胞诱导的自体胃癌细胞死亡比例增加[(20.62±2.27)%比(16.08±2.61)%， P<0.01)]。在间接接触共培养系统中，IL-9刺激并未增加CD8 + T细胞诱导自体胃癌细胞死亡比例[(5.21±0.70)%比(5.31±1.22)%， P＝0.998]。但在两种共培养系统中，IL-9刺激后γ-IFN分泌水平均增加[直接接触共培养系统：(100.40±12.05)pg/ml比(76.45±8.56)pg/ml；间接接触共培养系统：(78.00±9.98)pg/ml比(42.09±10.71)pg/ml； P<0.01]，TNF-α分泌水平均无明显变化(均 P>0.05)。在直接接触共培养系统中，CD4 + CCR4 - CCR6 - CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞组的靶细胞死亡比例为(22.01±3.05)%，γ-IFN水平为(104.5±12.84)pg/ml，均高于CD8 + T细胞+胃癌细胞组[分别为(16.08±2.61)%和(76.45±8.56)pg/ml，均 P<0.01]，但CD4 + CCR4 - CCR6 - CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞+抗IL-9中和抗体组的靶细胞死亡比例为(14.47±3.14)%，γ-IFN水平为(70.45±19.43)pg/ml，均低于CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞组(均 P<0.01)。 结论:肿瘤浸润性Th9细胞及其分泌的IL-9可促进胃癌患者CD8 + T细胞活性，增强抗肿瘤免疫应答。

胃肿瘤;Th9细胞;CD8 + T细胞 ;抗肿瘤

孙培胜;高正杰;范龙鑫;刘亚飞;陈炳合;穆淑真;闫争强

新乡医学院第一附属医院普通外科，新乡　453100

中华肿瘤杂志

[1]孙培胜;高正杰;范龙鑫;刘亚飞;陈炳合;穆淑真;闫争强-.肿瘤浸润性辅助性T细胞9细胞对胃癌患者CD8 + T细胞抗肿瘤活性的调控作用 )[J].中华肿瘤杂志,2022(11):1186-1193

+CCR4 ,CCR6 ,CXCR3 ,+Th9,CCR4

辅助性,胃癌患者,抗肿瘤活性,抗肿瘤免疫应答,新乡,乡医,健康体检者,外周血单个核细胞,PBMCs,手术切除,胃癌组织,组织分离,肿瘤浸润性淋巴细胞,TILs,自体,胃癌细胞,分选,酶联免疫吸附试验,流式细胞术,CD3 ,+CD4 ,+IL,9 ,实时荧光定量聚合酶链反应,聚合酶链反应检测,嘌呤,结合蛋白,PU,相对表达量,组人,试剂盒,blot,检测信号,信号转导和转录激活因子,STAT3,STAT6,磷酸化,细胞因子分泌,直接接触,间接接触,共培养系统,乳酸脱氢酶,LDH,靶细胞,细胞死亡,干扰素,IFN,细胞共培养,中和抗体,和胃,ml,细胞诱导,泌水,pg,+CD8 ,细胞活性,胃肿瘤

0.136687