[目的]探究活化核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)对热应激肉鸡心肌细胞氧化损伤的缓解作用及其机制.[方法]利用差速贴壁法结合化学纯化法制备肉鸡原代心肌细胞.将心肌细胞随机分为对照组(Control组)、热应激组(HS组)和Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ)预处理热应激组(TBHQ+HS组).对照组心肌细胞正常培养不做任何处理,HS组心肌细胞置于高温(43℃)培养箱处理2 h,TBHQ+HS组心肌细胞用50 μmol/L TBHQ预处理12 h,再进行热应激处理.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组心肌细胞相对活力;用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;用实时荧光定量PCR检测Nrf2、血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(glutamate cysteine ligase catalytic,GCLC)和 NAD(P)H ∶醌氧化还原酶 1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1)mRNA表达水平;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量.[结果]与对照组相比,热应激组肉鸡原代心肌细胞形态发生改变,出现空泡网状结构,心肌细胞的相对活力和SOD活性极显著降低(P＜0.01),MDA含量极显著升高(P＜0.01),细胞培养液中LDH活性极显著升高(P＜0.01),Nrf2/抗氧化反应原件(ARE)信号通路下游NQO1和GCLC mRNA表达升高,但差异不显著(P＞0.05),Nrf2和HO-1 mRNA表达显著增加(P＜0.05),但Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量增加不显著(P＞0.05);与热应激组相比,TBHQ预处理热应激组心肌细胞内空泡网状结构减少,心肌细胞的相对活力显著升高(P＜0.05),SOD活性极显著升高(P＜0.01),MDA含量显著降低(P＜0.05),细胞培养液中LDH活性极显著降低(P＜0.01),Nrf2/ARE信号通路下游NQO1和GCLC基因的表达水平显著上调(P＜0.05),Nrf2基因和总蛋白表达量显著增加(P＜0.05),H04基因和蛋白表达量极显著增加(P＜0.01).[结论]活化Nrf2可以上调Nrf2/ARE信号通路下游相关抗氧化基因和蛋白表达,提高热应激肉鸡心肌细胞的抗氧化能力,缓解热应激诱导的氧化损伤,提示Nrf2可能是肉鸡心肌细胞抗热应激氧化损伤的有效分子靶点.

热应激;肉鸡;心肌细胞;核因子红系2相关因子2(Nrf2);血红素氧合酶-1(HO-1)

武亚南;石玉祥;张永英;刘冠慧;宋伟光;钟翠红;王永霞

河北工程大学生命科学与食品工程学院,邯郸056038;晨光生物科技有限公司,邯郸056038

中国畜牧兽医

[1]武亚南;石玉祥;张永英;刘冠慧;宋伟光;钟翠红;王永霞-.活化Nrf2缓解热应激致肉鸡心肌细胞氧化损伤的研究)[J].中国畜牧兽医,2022(09):3343-3352

TBHQ+HS

Nrf2,缓解热应激,肉鸡,鸡心,心肌细胞,细胞氧化损伤,核因子,相关因子,nuclear,erythroid,related,缓解作用,差速,贴壁,化学纯,原代,Control,激活剂,叔丁基对苯二酚,tert,butylhydroquinone,培养箱,应激处理,偶氮,氮唑,MTT,比色法,细胞培养,培养液,乳酸脱氢酶,LDH,血红素氧合酶,heme,oxygenase,HO,连接酶,glutamate,cysteine,ligase,catalytic,GCLC,NAD,氧化还原酶,oxidoreductase,NQO1,蛋白质免疫印迹,免疫印迹法,blotting,总蛋白,细胞形态,形态发生,空泡,泡网,网状结构,氧化反应,原件,ARE,路下,H04,高热,抗氧化能力,抗热,分子靶点

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