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大豆中转基因成分微滴式数字PCR检测方法研究
文献摘要:
为了探讨转基因大豆品系及其衍生产品鉴定的高效技术手段,本研究建立了转基因大豆的微滴式数字PCR(ddPCR)筛选检测方法.利用3种方法提取大豆基因组DNA,分析提取方法和保存时间对微ddPCR检测拷贝数的影响.同时,应用特异性引物,以4种转基因大豆筛选靶标元件为扩增靶标,对微滴式数字PCR检测方法进行体系优化、灵敏度测试和准确度验证.结果表明:使用Promega植物基因组DNA提取试剂盒,提取的DNA对转基因作物的外源拷贝数进行鉴定的结果更为准确可靠.与荧光定量筛选方法相比,ddPCR方法更加灵敏和准确.检测体系的最适探针浓度为100 nmol·L-1,最佳退火温度为58℃.以4种靶标元件CaMV35S启动子、T-NOS终止子、pat基因和T-E9终止子开展ddPCR检测,检测灵敏度较高,准确性较好.转基因大豆含量为1%时对CaMV35S和T-NOS靶标参数的绝对检测限为2个拷贝,pat为5个拷贝,T-E9为10个拷贝.本研究建立的ddPCR检测方法可用于大豆转化体的定量检测.
文献关键词:
转基因大豆;检测方法;数字PCR;分子检测
作者姓名:
刘炜;杨芳;李丽华;王英姿;陈信全
作者机构:
江门海关技术中心,广东江门529000
文献出处:
引用格式:
[1]刘炜;杨芳;李丽华;王英姿;陈信全-.大豆中转基因成分微滴式数字PCR检测方法研究)[J].大豆科学,2022(04):448-454
A类:
B类:
转基因大豆,品系,衍生产品,品鉴,ddPCR,保存时间,拷贝数,特异性引物,靶标,体系优化,灵敏度测试,Promega,植物基,试剂盒,转基因作物,定量筛选,筛选方法,检测体系,nmol,退火温度,CaMV35S,启动子,NOS,终止子,pat,E9,检测灵敏度,绝对检测,检测限,转化体,定量检测,分子检测
AB值:
0.353962
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