典型文献
根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌遗传转化体系构建
文献摘要：
[背景和目的]尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)可引起烟草镰刀菌根腐病(Fusarium root rot of tobacco),为明确病原菌致病相关基因.[方法]以烟草强致病性尖孢镰刀菌菌株B-9-1的分生孢子为受体,利用携带潮霉素B(hygromycin B,hyg)质粒的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化,获得能够稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的尖孢镰刀菌转化菌株,构建烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系.[结果](1)尖孢镰刀菌的最优转化体系为:潮霉素B最适质量浓度50 μg/mL,在25℃条件下,以1 cm宽的条形硝酸纤维膜为载体,将携带有pCAM-GFP-hyg质粒的根癌农杆菌摇菌培养至OD600=0.7,与震荡培养24 h获得的浓度为106个/mL的尖孢镰刀菌分生孢子悬浮液在含有200 μmol/L乙酰丁香酮的共培养基上共培养48 h.(2)转化子继代培养、PCR检测和荧光显微观察结果表明外源GFP基因成功整合到烟草尖孢镰刀菌基因组中并可以进行稳定遗传表达.(3)Sourthern blot分析结果进一步证明T-DNA成功整合到尖孢镰刀菌基因组中,且60％以上为单拷贝插入.[结论]本研究成功构建了根癌农杆菌介导的烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系,为烟草尖孢镰刀菌基因功能及病原菌的致病机制研究提供基础.
文献关键词：
烟草尖孢镰刀菌;遗传转化;转化子
中图分类号：
作者姓名：
李娟;邱睿;张盈盈;李小杰;李成军;李淑君
作者机构：
河南省农业科学院烟草研究所,黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室,河南省许昌市永昌大道与青梅路交叉口 461000;定西市植保植检站,甘肃省定西市安定区公园路22号743000
文献出处：
引用格式：
[1]李娟;邱睿;张盈盈;李小杰;李成军;李淑君-.根癌农杆菌介导的尖孢镰刀菌遗传转化体系构建)[J].中国烟草学报,2022(04):106-113
A类：
hygromycin,hyg,烟草尖孢镰刀菌,pCAM,Sourthern
B类：
根癌农杆菌,农杆菌介导,遗传转化体系,Fusarium,oxysporum,烟草镰刀菌根腐病,root,tobacco,致病性,分生孢子,潮霉素,质粒,Agrobacterium,tumefaciens,稳定表达,绿色荧光蛋白,green,fluorescent,protein,GFP,条形,纤维膜,OD600,震荡,悬浮液,丁香,共培养,转化子,继代培养,荧光显微,显微观察,合到,稳定遗传,blot,拷贝,基因功能,致病机制
AB值：
0.217223
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
