目的 探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据.方法 选取SPF级4～6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体.利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150 μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异.结果 (1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0 μg/ml组(P＜0.05),而M Ⅱ期卵母细胞百分比均显著低于0 μg/ml组(P＜0.05).使用150 μg/ml作为后续实验工作浓度;(3)qPCR的结果显示,小鼠COCs中卵丘扩展相关基因Has2的mRNA表达水平在体内成熟组及体外成熟培养组各组间的差异无统计学意义(P＞0.05),exo+组和exo-组的Tnfaip6、Bcl2和Bax mRNA表达水平均显著低于control组(P＜0.05或P＜0.01),exo+组Ptgs2的mRNA表达水平显著低于control组(P＜0.05);此外,exo+组Tnfaip6、Ptgs2和Bcl2的mRNA表达水平均显著低于exo-组(P＜0.05或P＜0.01).结论 DOR患者卵泡液外泌体能够抑制小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩展和减数分裂恢复,并且显著抑制了卵丘扩展相关基因Ptgs2和Tnfaip6以及细胞凋亡抑制基因Bcl2的表达.

卵巢储备功能减退;外泌体;卵丘-卵母细胞复合体;体外成熟

柳州市人民医院生殖医学科,柳州 545006

[1]沈开元;杨冠群;罗平;代小丽;黄萍;梁媛媛;李顺;陈立群;曲晓力-.卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响)[J].生殖医学杂志,2022(10):1422-1429

exo+,Has2,Tnfaip6

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