目的 探索不同冻存保护剂对2周龄未性成熟小鼠睾丸生精细胞冻存的影响.方法 取2周龄雄性小鼠两步酶法制备睾丸细胞悬液(TCS),根据DMEM/F12培养基中不同浓度二甲基亚砜(DMSO)、蔗糖、海藻糖的组合将冻存保护剂分为5组:A组含10％ DMSO和10％胎牛血清(FBS);B组含10％ DMSO、0.1 mol/L蔗糖和10％ FBS;C组含10％DMSO、0.1 mol/L海藻糖和10％ FBS;D组含15％ DMSO、0.1 mol/L蔗糖0.1 mol/L海藻糖和10％ FBS;E组含10％DMSO、0.1 mol/L蔗糖、0.1 mol/L海藻糖和10％ FBS.将5组睾丸细胞采用程序化冻存于液氮中,2月后进行复苏.台盼蓝检测细胞活性,计算各组细胞冻存后的细胞活率和复苏率,流式细胞仪检测睾丸生精细胞的凋亡和线粒体膜电位变化,以新鲜的2周龄小鼠睾丸生精细胞作为对照组.结果 与冻存前比较,冻存复苏后各组的细胞活率均显著下降(P＜0.05),且冻存组中E组细胞活率下降程度最低[(83.03±1.61)％]、细胞复苏率最高[(87.37±1.66)％](P＜0.05).细胞凋亡比较中,冻存复苏后各组细胞凋亡率均显著高于对照组[(18.77±0.95)％](P＜0.05),其中A组细胞凋亡率最高[(57.08±2.40)％],E组细胞凋亡率最低[(29.62±1.95) ％](P＜0.05).线粒体膜电位比较中,各组复苏后细胞线粒体膜电位均低于冻存前,除E组外,其余4组均显著低于对照组(P＜0.05),在冻存的5组中E组下降程度最低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同冷冻保护剂对未性成熟小鼠睾丸生精细胞冻存效果有显著影响,其中含10％ DMSO、0.1 mol/L蔗糖、0.1 mol/L海藻糖及10％ HBS组合冷冻剂方案是冻存未性成熟小鼠睾丸生精细胞较适宜的冷冻保护剂方案.

睾丸生精细胞;冷冻保护剂;生育力保存;凋亡;线粒体膜电位

张啸龙;张杰平;王金玉;于岚;冯科;曲晓伟;夏彦清;郭海彬;万锋;张翠莲

郑州大学人民医院河南省人民医院,郑州 450003;河南大学人民医院,郑州450003;河南大学医学院,郑州450003

生殖医学杂志

[1]张啸龙;张杰平;王金玉;于岚;冯科;曲晓伟;夏彦清;郭海彬;万锋;张翠莲-.不同冻存保护剂对未性成熟小鼠睾丸生精细胞冻存的影响)[J].生殖医学杂志,2022(03):366-372

冷冻剂

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