目的:探究人脐带间充质干细胞来源的外泌体(MSC-exosomes)对盆腔器官脱垂(POP)患者阴道壁成纤维细胞的调节作用.方法:采用超速离心法提取MSC-exo-somes,应用透射电镜观察外泌体形态,Western blot法检测特异分子HSP90、CD63和TSG101表达,对外泌体进行综合鉴定.采用组织爬块和胶原酶消化法从POP患者阴道壁组织中分离培养成纤维细胞.采用PKH-67绿色荧光染料标记外泌体,添加PKH-67标记的MSC-exosomes,观察成纤维细胞对外泌体的摄取情况.分别将终浓度为50μg/mL、100μg/mL的MSC-exosomes加入成纤维细胞中,对照组加等体积PBS.MTS法检测3组细胞在12、24、36、48、60h和72h的增殖情况.收集成纤维细胞蛋白,Western blot法检测成纤维细胞胞外基质代谢相关基因CollagenⅠ、CollagenⅢ、LOXL-2、Fibronectin和MMP-2等表达,并进行相对定量统计分析.结果:分离到的外泌体特异表达标志蛋白HSP90和CD63,不表达内质网蛋白TSG101,透射电镜观察到具有双层脂膜结构的圆形囊泡小体,表明分离得到了外泌体.从脱垂患者阴道壁组织中成功培养得到成纤维细胞,其形态呈长梭型或纺锤形,细胞排列成簇状.PKH-67标记的MSC-exosomes添加24 h后,细胞内可见丰富的绿色荧光信号,表明MSC-exosomes可被阴道壁成纤维细胞有效大量摄取.50、100μg/mL MSC-exosomes均可促进阴道壁成纤维细胞的增殖.50、100μg/mL exosome作用24h后,CollagenⅠ、CollagenⅢ、LOXL-2、Fibronectin表达增加,其中Fibronectin表达升高最显著,100μg/mL exosome组较50μg/mL exosomes组促进作用更明显,Collagen I在48 h时较24 h升高作用更明显,而MMP-2在MSC-exosomes添加后均出现蛋白表达下降,表明细胞外基质分解降低.结论:MSC-exosomes可有效促进POP阴道壁成纤维细胞的增殖,并促进成纤维细胞胞外基质的合成,减少细胞外基质的降解.

间充质干细胞;外泌体;成纤维细胞;细胞外基质;盆腔器官脱垂

首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院妇科,北京 100026

[1]范琳媛;王静璇;魏薇;段爱红;卢丹-.人脐带间充质干细胞来源的外泌体对盆底脱垂患者阴道壁成纤维细胞的调节作用)[J].现代妇产科进展,2022(11):813-819

成纤维细胞蛋白,LOXL

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