典型文献
广藿香PcHAD基因克隆及其参与广藿香醇生物合成功能分析
文献摘要：
目的 从广藿香Pogostemon cablin中克隆HAD(haloacid dehalogenase)超级家族蛋白水解酶基因PcHAD,验证其编码蛋白与广藿香醇合酶(patchoulol synthase,PcPTS)蛋白互作,探究其参与调控广藿香醇生物合成的作用.方法 从广藿香转录组数据中,筛选出一条具有完整编码区并且包含HAD-like结构域的HAD基因序列(PcHAD),并对该基因进行克隆和生物信息学分析.利用qRT-PCR对PcHAD的表达模式进行分析.利用酵母双杂交实验进一步验证PcHAD与广藿香PcPTS蛋白的互作情况.通过瞬时过表达PcHAD,分析其对广藿香醇甲羟戊酸合成途径(mevalonate pathway,MVA)相关基因的表达以及对广藿香醇含量的影响.结果 从广藿香中克隆得到HAD-like基因PcHAD,其开放阅读框为1149 bp,编码蛋白长度为382个氨基酸,蛋白相对分子质量为43 000,且为不稳定的亲水性蛋白,亚细胞定位结果表明该蛋白定位于叶绿体.酵母双杂交实验结果表明PcHAD完整蛋白能与PcPTS完整蛋白互作,且PcHADN与PcPTSN互作.与对照组相比,瞬时过表达PcH4D广藿香叶中的广藿香醇含量提高了 30％,MVA途径基因包含PTS、FPPS和HMGR在内表达量均显著上调.结论 从广藿香中克隆得到1个与广藿香醇合酶PcPTS互作的PcHAD基因,该基因在瞬时过表达后上调PTS和MVA途径多个基因的表达量,且能够显著提.高广藿香醇的含量,表明该基因可能在广藿香醇生物合成中发挥正向调控作用,为进一步揭示广藿香中HAD-PTS复合体的功能提供科学依据.
文献关键词：
广藿香;广藿香醇;HAD;蛋白互作;合成调控;功能分析
中图分类号：
作者姓名：
吴带娣;黄慧玲;单耀楷;邹璇;龚丽珍;詹若挺;陈立凯
作者机构：
广州中医药大学中药学院,广东广州 510006;岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学),广东广州 510006;岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心,广东茂名 525000
文献出处：
引用格式：
[1]吴带娣;黄慧玲;单耀楷;邹璇;龚丽珍;詹若挺;陈立凯-.广藿香PcHAD基因克隆及其参与广藿香醇生物合成功能分析)[J].中草药,2022(13):4100-4108
A类：
PcHAD,Pogostemon,cablin,haloacid,dehalogenase,patchoulol,PcPTS,PcHADN,PcPTSN,PcH4D,FPPS
B类：
基因克隆,广藿香醇,生物合成,功能分析,蛋白水解,水解酶,酶基因,编码蛋白,synthase,蛋白互作,转录组数据,整编,编码区,like,结构域,基因序列,生物信息学分析,qRT,表达模式,酵母双杂交实验,过表达,甲羟戊酸,合成途径,mevalonate,pathway,MVA,开放阅读框,bp,白相,相对分子质量,亲水性,亚细胞定位,定位结果,蛋白定位,叶绿体,香叶,HMGR,复合体,合成调控
AB值：
0.160306
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