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新型重组Ulp1的制备工艺研究
文献摘要：
类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)是从融合蛋白中移除小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)标签工艺中的重要工具蛋白酶,在重组多肽和蛋白生产制备中具有广泛应用.Ulp1蛋白易聚集的特性给下游分离纯化工艺带来了诸多挑战.为克服这些问题,本研究设计并重组表达制备了一种S13-Ulp1融合蛋白,以提高Ulp1酶的溶解度,减少聚集,同时降低蛋白等电点,便于采用阴离子交换色谱纯化.通过对发酵、澄清等步骤的工艺参数进行优化,建立了一条发酵表达产量高、纯化工艺简便的S13-Ulp1融合蛋白制备工艺.优化后发酵产量达到了 2.34 g/L,下游分离纯化总收率为64％,制得的S13-Ulp1蛋白的SDS-PAGE纯度为95％.经酶切试验验证,S13-Ulp1融合蛋白具有与Ulp1相同的特异性,可高效地移除SUMO标签,获得目的多肽.
文献关键词：
小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)蛋白酶;类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1);重组;表达;纯化;离子交换色谱
中图分类号：
作者姓名：
徐海悦;吴勇;李乐乐;黄宗庆;化浩举;冯军
作者机构：
中国医药工业研究总院,上海201203;上海多米瑞生物技术有限公司,上海201203
文献出处：
引用格式：
[1]徐海悦;吴勇;李乐乐;黄宗庆;化浩举;冯军-.新型重组Ulp1的制备工艺研究)[J].中国医药工业杂志,2022(10):1432-1438
A类：
Ulp1
B类：
制备工艺,泛素特异性蛋白酶,融合蛋白,移除,小分子,饰物,SUMO,多肽,分离纯化,纯化工艺,重组表达,表达制备,S13,溶解度,低蛋白,等电点,阴离子交换色谱,色谱纯化,澄清,达产,SDS,PAGE
AB值：
0.215993
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