背景:核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎性因子被证实与多种炎症性疾病相关,调控其表达将成为治疗相关疾病的关键.目的:验证CD1d参与了调控NLRP3炎性因子表达,并且进一步证明CD1d是通过信号调节蛋白α(signal regulatory protein-α,SIRPα)来达到调控目的.方法:①使用Flag-CD1d、HA-SIRPα慢病毒过表达载体转染293T细胞进行免疫共沉淀实验,验证CD1d与SIRPα的相互作用;②使用Flag-CD1d慢病毒过表达载体转染RAW264.7细胞,RT-qPCR检测NLRP3等基因表达;③使用HA-SIRPα慢病毒过表达载体转染RAW264.7细胞,在脂多糖刺激后RT-qPCR、Western blot检测NLRP3等基因和蛋白表达;④使用SIRPα慢病毒RNAi载体转染RAW264.7细胞,在脂多糖刺激后RT-qPCR、Western blot检测NLRP3等基因和蛋白表达.结果 与结论:①免疫共沉淀实验证实CD1d与SIRPα存在相互作用;②过表达CD1d基因后,NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18基因表达明显低于正常组(P<0.05);③在脂多糖刺激后过表达SIRPα组NLRP3基因表达明显低于正常组(P<0.05);pro-IL-1β、pro-IL-18基因表达与正常组差异无显著性意义(P>0.05);过表达SIRPα组p38、p-p38、NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18蛋白表达明显低于SIRPα干扰组(P<0.01);④脂多糖刺激后干扰SIRPα组NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18基因表达明显高于正常组(P<0.05);干扰SIRPα组p38、p-p38、NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18蛋白表达明显高于过表达SIRPα组(P<0.01);⑤结果表明,CD1d与细胞膜上SIRPα形成复合物,通过SIRPα抑制下游p38MAPK/NF-κB通路,最终达到抑制NLRP3等炎性因子表达的目的.

CD1d;信号调节蛋白α;NLRP3;炎性因子;p38MAPK;NF-κB;通路

向明芝;袁紫林;王刚;程洁;刁波;刘跃平

武汉科技大学医学院,湖北省武汉市 430081;中部战区总医院基础医学实验室,湖北省武汉市 430070;中枢神经系统肿瘤发生与干预湖北省重点实验室,湖北省武汉市 430070;南方医科大学第一临床医学院,广东省广州市 510515

中国组织工程研究

[1]向明芝;袁紫林;王刚;程洁;刁波;刘跃平-.CD1d通过信号调节蛋白α抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3等炎性因子的表达)[J].中国组织工程研究,2022(24):3826-3832

CD1d,调节蛋白,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白,炎性因子,nucleotide,binding,oligomerization,domain,like,receptor,protein,NLRP3,炎症性疾病,疾病相关,相关疾病,signal,regulatory,SIRP,Flag,HA,慢病毒,过表达载体,转染,293T,免疫共沉淀,RAW264,qPCR,脂多糖,blot,RNAi,低于正常,细胞膜,复合物,p38MAPK,达到抑制

0.173113