典型文献
表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组复制缺陷型HAdV-5的构建及鉴定
文献摘要：
[目的]采用AdEasy系统构建能表达传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组复制缺陷型人5型腺病毒(Human adenovirus serotype-5,HAdV-5),以期为IBDV活载体疫苗的研发提供新的思路.[方法]通过同源重组将VP2基因克隆至穿梭质粒pAdTrack-GOI构建重组穿梭质粒pAdTrack-VP2;PmeⅠ酶线性化pAdTrack-VP2后热击转化大肠杆菌BJ5183-AD-1感受态细胞,利用菌内同源重组构建重组腺病毒质粒pAd-VP2;将pAd-VP2经Pac Ⅰ酶线性化和纯化后转染HEK293A细胞,包装表达VP2蛋白的重组复制缺陷型HAdV-5(rAd5-VP2),将鉴定正确的重组病毒感染非复制型细胞(Vero、CEF和DF1细胞)并分析目的蛋白的表达情况.[结果]将rAd5-VP2通过HEK293A细胞扩大培养,测得第10代病毒的滴度为7.9×109 IFU/mL;RT-PCR结果显示,VP2基因在重组腺病毒中能稳定翻译;Western blotting和间接免疫荧光试验均检测到VP2蛋白的表达,蛋白分子质量为41 ku;将rAd5-VP2感染Vero、CEF和DF1细胞也检测到VP2蛋白的表达,表明HAdV-5有作为IBDV活载体疫苗研发的可能性.[结论]本研究构建了重组复制缺陷型HAdV-5,该毒株能感染部分哺乳动物细胞和家禽细胞并能检测到目的蛋白的表达.
文献关键词：
传染性法氏囊病;VP2蛋白;重组复制缺陷型人5型腺病毒
中图分类号：
作者姓名：
徐婷;熊挺;李淋雨;刘郁夫;温良海;谢文婷;杨泽坤;陈瑞爱
作者机构：
华南农业大学兽医学院,广州510642;岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心,肇庆526238;华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司,肇庆526238;肇庆大华农生物药品有限公司,肇庆526238
文献出处：
引用格式：
[1]徐婷;熊挺;李淋雨;刘郁夫;温良海;谢文婷;杨泽坤;陈瑞爱-.表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组复制缺陷型HAdV-5的构建及鉴定)[J].中国畜牧兽医,2022(12):4524-4534
A类：
GOI,Pme,rAd5
B类：
传染性法氏囊病病毒,VP2,复制缺陷,HAdV,AdEasy,系统构建,Infectious,bursal,disease,IBDV,Human,adenovirus,serotype,活载体疫苗,同源重组,基因克隆,穿梭,质粒,pAdTrack,线性化,大肠杆菌,BJ5183,AD,感受态,组构,重组腺病毒,病毒质,Pac,转染,HEK293A,重组病毒,Vero,CEF,DF1,目的蛋白,扩大培养,滴度,IFU,blotting,间接免疫荧光试验,分子质量,ku,疫苗研发,研究构建,毒株,哺乳动物细胞,家禽
AB值：
0.311249
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