典型文献
刺激隐核虫钙调蛋白基因的分子鉴定
文献摘要：
为了解钙调蛋白在刺激隐核虫生长发育过程中的作用,实验从刺激隐核虫滋养体cDNA文库中克隆出钙调蛋白基因(cicam),优化密码子后人工合成开放阅读框(ORF),构建成重组质粒pGEX-4T-1/cicam,将其转化至大肠杆菌后,通过ZYM-5052自诱导培养基诱导重组子表达.用谷胱甘肽琼脂糖凝胶及凝血酶纯化重组蛋白rCiCaM,并用其免疫小鼠BALB/c株获得多克隆抗体.分别用逆转录PCR和免疫印迹实验检测cicam及其编码蛋白CiCaM在各期虫体中的表达.通过间接荧光抗体实验检测CiCaM在幼虫中的定位.通过覆盖印迹实验(Blot overlay assay)初步探讨了重组蛋白rCiCaM结合重组肌动蛋白解聚因子的活性.结果显示,cicam的ORF为450 bp,编码含149个氨基酸的肽链,其分子量预测值为16.9 ku;原核表达的融合蛋白GST-rCiCaM及切除GST标签的rCiCaM的表观分子量分别为43和16.9 ku,均与预测值相符;cicam在刺激隐核虫的各个发育阶段都有稳定的表达,其表达产物CiCaM的分子量与预测值相符;在幼虫细胞内CiCaM在胞质中均有分布,尤其在4个大核周围及胞口部位更为富集;CiCaM与CiADF2之间可能发生Ca2+依赖性的相互作用.该研究丰富了刺激隐核虫病原分子生物学知识,为刺激隐核虫病防治方法的开发提供参考.
文献关键词：
刺激隐核虫;钙调蛋白;克隆;表达;分子鉴定
中图分类号：
作者姓名：
倪炜;张经伟;余玲莹;黄晓红
作者机构：
福建师范大学生命科学学院,福建省发育与神经生物学重点实验室,福建 福州 350117;美国弗罗里达大学分子遗传学和微生物学系,Florida Gainesville 32610
文献出处：
引用格式：
[1]倪炜;张经伟;余玲莹;黄晓红-.刺激隐核虫钙调蛋白基因的分子鉴定)[J].水产学报,2022(05):774-784
A类：
刺激隐核虫,cicam,ZYM,rCiCaM,CiCaM,CiADF2
B类：
钙调蛋白,分子鉴定,cDNA,文库,密码子,人工合成,开放阅读框,ORF,重组质粒,pGEX,4T,大肠杆菌,自诱导,诱导培养基,谷胱甘肽,琼脂糖凝胶,凝血酶,重组蛋白,BALB,多克隆抗体,逆转录,免疫印迹实验,实验检测,编码蛋白,各期,虫体,荧光抗体,幼虫,盖印,Blot,overlay,assay,肌动蛋白,解聚,bp,肽链,分子量,ku,原核表达,融合蛋白,GST,发育阶段,达产,口部,Ca2+,分子生物学,生物学知识,防治方法
AB值：
0.303339
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