[背景]丝氨酸合成途径(SSP)关键酶在肿瘤的生长、增殖、侵袭中发挥重要作用,但其在砷致癌中的作用尚不明确.[目的]以人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)和NaAsO2所致恶性转化HaCaT(T-HaCaT)细胞为研究对象,观察NaAsO2染毒对SSP关键酶[如磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、磷酸丝氨酸转氨酶1(PSAT1)和磷酸丝氨酸磷酸酶(PSPH)]表达及对细胞增殖、迁移能力的影响,探讨SSP关键酶在砷致癌中的作用.[方法](1)取课题组前期构建的T-HaCaT细胞,实验分组为传代对照(0μmol·L–1 NaAsO2)组、T-HaCaT(0.5μmol·L–1 NaAsO2)组、NCT503(PHGDH抑制剂,25μmol·L–1)组、NCT503(25μmol·L–1)+T-HaCaT(0.5μmol·L–1 NaAsO2)组.Western blotting法检测传代对照组和T-HaCaT组细胞的SSP关键酶蛋白表达水平,CCK8法和细胞划痕试验分别检测各组细胞的增殖率和迁移率.(2)取生长良好的对数生长期HaCaT细胞,以0、0.625、1.25和2.5μmol·L–1 NaAsO2染毒细胞0、24、48和72 h,检测细胞增殖率和SSP关键酶的蛋白表达水平.后续实验给予HaCaT细胞25μmol·L–1 NCT503预处理6 h后,用2.5μmol·L–1 NaAsO2继续染毒72 h,实验分组为对照(0μmol·L–1 NaAsO2)组、染毒(2.5μmol·L–1 NaAsO2)组、预处理组(25μmol·L–1 NCT503)、预处理(25μmol·L–1 NCT503)+染毒(2.5μmol·L–1 NaAsO2)组,检测各组细胞的增殖率.[结果]T-HaCaT组细胞中PHGDH的蛋白表达水平是传代对照组的1.60倍(P<0.05),其增殖率(177.51％±14.69％)和迁移率(53.85％±0.94％)高于传代对照组[(100.00％±0.00％)、(24.30％±2.26％)](均P<0.05).NCT503干预后,NCT503+T-HaCaT组细胞的增殖率(144.97％±8.08％)和迁移率(35.80％±0.99％)较T-HaCaT组细胞降低(均P<0.05).NaAsO2染毒72 h后HaCaT细胞的增殖率随染毒浓度的增加而增加(r=0.862,P<0.05),与此一致,各染毒组HaCaT细胞中SSP关键酶的蛋白水平均较对照组表达增加(均P<0.05).2.5μmol·L–1 NaAsO2染毒后的HaCaT细胞增殖率随染毒时间的延长而增加(r=0.775,P<0.05),与细胞中PHGDH蛋白表达水平的变化一致.NCT503干预后,预处理+染毒组细胞增殖率低于染毒组细胞(P<0.05).[结论]SSP关键酶可能在NaAsO2所致的T-HaCaT细胞增殖中扮演重要的角色.

磷酸甘油酸脱氢酶;磷酸丝氨酸氨基转移酶;磷酸丝氨酸磷酸酶;亚砷酸钠;HaCaT细胞;NaAsO2所致的恶性转化HaCaT细胞

李凤敏;韩进美;黄红茜;王娜;张爱华;韩雪

贵州医科大学,公共卫生与健康学院/环境污染与疾病监控教育部重点实验室,贵州 贵阳 550025

环境与职业医学

[1]李凤敏;韩进美;黄红茜;王娜;张爱华;韩雪-.NaAsO2染毒HaCaT细胞中丝氨酸合成途径关键酶的表达及其作用)[J].环境与职业医学,2022(05):545-549

磷酸丝氨酸磷酸酶,NCT503,NCT503+T,磷酸丝氨酸氨基转移酶

NaAsO2,染毒,HaCaT,合成途径,关键酶,SSP,致癌,永生化,角质形成细胞,恶性转化,磷酸甘油酸脱氢酶,PHGDH,转氨酶,PSAT1,PSPH,迁移能力,传代,blotting,蛋白表达水平,CCK8,划痕试验,细胞的增殖,迁移率,对数生长期,细胞增殖率,亚砷酸钠

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