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ASFV核酸防污染恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立
文献摘要：
本研究基于UNG酶的生物学特性(能特异性识别并切割DNA分子中出现的尿嘧啶核苷),在PCR反应体系中引入UNG酶,使用农业农村部172号公告推荐的荧光定量PCR方法的引物和探针,通过对上下游引物、探针、Taq酶等反应体系的优化,建立防污染的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)检测方法.结果显示:优化后的iiPCR方法特异性好,只扩增出ASFV的特异片段,对猪瘟病毒、高致病性蓝耳病病毒、伪狂犬病毒、流行性乙型脑炎病毒、猪细小病毒、猪流行性腹泻病毒等病原不能检出,检测下限为25.5拷贝/μL;具有良好的稳定性,组内和组间变异系数均＜5％.该方法对实验室环境及操作人员的要求不严格,对PCR反应的反应性、便捷性和时效性无影响,也不影响后续实验,同时可以解决阳性对照物及扩增产物对PCR扩增体系污染的问题,减少假阳性的出现,提高检测方法的可靠性,为ASFV的诊断提供了可靠的手段.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒(ASFV);UNG酶;防污染;恒温隔绝式荧光PCR
中图分类号：
作者姓名：
陈雪蓉;徐林;王远微;汤承;岳华
作者机构：
西南民族大学畜牧兽医学院,四川成都610041;四川省甘孜州动物疫病预防控制中心,四川 康定626000
文献出处：
引用格式：
[1]陈雪蓉;徐林;王远微;汤承;岳华-.ASFV核酸防污染恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立)[J].四川畜牧兽医,2022(08):33-36
A类：
iiPCR
B类：
ASFV,防污染,恒温,隔绝,UNG,生物学特性,特异性识别,尿嘧啶,反应体系,农业农村部,公告,引物,上下游,Taq,法特,高致病性,蓝耳病,伪狂犬病毒,流行性乙型脑炎病毒,猪细小病毒,猪流行性腹泻病毒,检测下限,拷贝,组间变异,实验室环境,操作人员,不严,反应性,便捷性,阳性对照,扩增产物,假阳性,高检,非洲猪瘟病毒
AB值：
0.276671
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