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在cDNA文库构建中探究癌症病人血浆外泌体miRNA的特异性扩增
文献摘要：
血浆外泌体微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)与癌症的发生、诊断和治疗密切相关,但其分子机制尚不明晰.本研究探讨了癌症病人血浆外泌体miRNAs在cDNA文库构建中非特异性扩增的解决方案.在酶切法中,采用核酸外切酶T(exonucleaseT,EXOT)和phi29 DNA聚合酶降解引物;在磁珠法中,利用DNA结合磁珠分离模板和引物.随后,采取琼脂糖凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测磁珠分离情况,运用 RT-qPCR检测癌症病人血浆外泌体miRNA和不同连接物的含量变化.结果显示,非特异性扩增来源于miRNA的连接物USR5SR;核酸外切酶T(EXOT)和phi29DNA聚合酶虽可降解USR5SR,但模板链也会发生降解;磁珠分离法中以9％PEG沉淀引物片段、15％PEG沉淀模板链效果最佳.综上所述,磁珠分离法能够高效解决cDNA文库构建中的非特异性扩增,从而实现293T细胞和癌症病人血浆外泌体miRNA cDNA文库的成功构建.
文献关键词：
microRNAs;cDNA文库;磁珠分离;非特异性扩增
中图分类号：
作者姓名：
王娜;何飞;郁宏伟;何栾樱;熊国良;卢建东;喻长远;王诗卉
作者机构：
北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;深圳市中医院,广东 深圳518000
文献出处：
引用格式：
[1]王娜;何飞;郁宏伟;何栾樱;熊国良;卢建东;喻长远;王诗卉-.在cDNA文库构建中探究癌症病人血浆外泌体miRNA的特异性扩增)[J].生物工程学报,2022(06):2213-2223
A类：
exonucleaseT,EXOT,phi29,USR5SR,phi29DNA
B类：
cDNA,文库构建,癌症病人,人血浆,血浆外泌体,微小核糖核酸,microRNAs,miRNAs,诊断和治疗,非特异性扩增,核酸外切酶,酶降解,引物,磁珠法,磁珠分离,琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳,离情,qPCR,接物,含量变化,可降解,分离法,PEG,综上所述,293T
AB值：
0.172287
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