目的研究雷公藤甲素影响睾丸支持细胞的人白细胞分化抗原36(CD36)蛋白表达及脂质代谢的作用与分子机制.方法体外培养小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞,CCK-8法检测雷公藤甲素(40、80、160、320、640nmol·L-1)作用24h细胞存活率;流式细胞术测定雷公藤甲素(80、160、320nmol·L-1)作用24h细胞凋亡率;氟硼二吡咯化合物(BODIPY)染色和油红O染色检测雷公藤甲素(80、160、320nmol·L-1)作用24h细胞内脂滴聚积情况;试剂盒法检测雷公藤甲素(80、160、320nmol·L-1)作用24h细胞内三酰甘油(TG)水平;TM4细胞经0.1mmol·L-1三磷酸腺苷(ATP)预处理3h后,再与160nmol·L-1雷公藤甲素共处理24h,用CCK-8法检测TM4细胞的存活率;Western blotting法检测雷公藤甲素(40、80、160、320nmol·L-1)作用24h、或160nmol·L-1雷公藤甲素作用6、12、24、36、48h 后 TM4 细胞中 CD36 蛋白表达量;Western blotting 法检测雷公藤甲素(40、80、160、320nmol·L-1)作用 24h 蛋白激酶1(PKD1)及其磷酸化蛋白、组蛋白去乙酰化酶7(HDAC7)和叉头框蛋白O1(FOXO1)的蛋白表达水平.结果与对照组比较,雷公藤甲素80、160、320、640 nmol·L-1浓度组TM4细胞存活率显著下降(P＜0.05、0.01),半数抑制浓度(IC50)为214.1 nmol·L-1;80、160、320mmol·L-1雷公藤甲素的细胞凋亡率分别为11.89％、23.17％、32.12％,与对照组比较差异显著(P＜0.05、0.01).BODIPY染色结果显示,与对照组比较,雷公藤甲素组细胞内的红色荧光强度显著下降(P＜0.01),油红O染色也显示,雷公藤甲素160nmol·L-1组细胞内脂滴数量明显低于对照组;与对照组比较,雷公藤甲素组TM4细胞内TG水平显著下降(P＜0.01).与雷公藤甲素组比较,使用ATP协同给药显著减轻了雷公藤甲素对TM4细胞存活率的抑制(P＜0.0l).与对照组比较,80、160、320nmol·L-1的雷公藤甲素作用24h后,TM4细胞的CD36蛋白表达量显著上升(P＜0.01),160nmol·L-1雷公藤甲素作用于TM4细胞6、12、24、36、48h,CD36的表达水平随时间的延长先升高后降低,在24h达到峰值(P＜0.05).与对照组比较,雷公藤甲素组TM4细胞中PKD1及其丝氨酸744-748位点磷酸化水平、HDAC7和FOXO1的蛋白表达均受到显著抑制(P＜0.05..0.01).结论雷公藤甲素对睾丸支持细胞具有明显的损伤作用,损伤机制与其诱导的脂质代谢紊乱和ATP缺乏相关.CD36在损伤过程中表达量先升高后降低,其初期代偿性上升可能是一种细胞的应激性保护机制,PKD1/HDAC7/FOXO1信号通路的抑制介导了 CD36表达的调控.

雷公藤甲素;睾丸支持细胞;脂代谢紊乱;人白细胞分化抗原36(CD36);三磷酸腺苷;蛋白激酶1;组蛋白去乙酰化酶7;叉头框蛋白01

中山大学药学院,广东广州 510006;广东药科大学 药学院,广东广州 510006

[1]罗立;卢树宏;张嘉慧;郑锦芬;沈飞海;黄芝瑛-.雷公藤甲素对小鼠睾丸支持细胞人白细胞分化抗原36蛋白表达及脂质代谢水平的影响)[J].药物评价研究,2022(07):1266-1273

640nmol,320nmol,160nmol,320mmol

雷公藤甲素,睾丸支持细胞,白细胞分化抗原,代谢水平,CD36,体外培养,细胞系,TM4,CCK,24h,细胞存活率,流式细胞术,细胞凋亡率,吡咯化合物,BODIPY,内脂,脂滴,聚积,试剂盒法,三酰甘油,1mmol,三磷酸腺苷,ATP,3h,共处理,blotting,48h,蛋白激酶,PKD1,磷酸化,组蛋白去乙酰化酶,HDAC7,叉头框蛋白,FOXO1,蛋白表达水平,半数抑制浓度,IC50,染色结果,红色荧光,荧光强度,0l,丝氨酸,损伤作用,损伤机制,脂质代谢紊乱,代偿,应激性,保护机制,脂代谢紊乱

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