目的 构建肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)小鼠及细胞模型,观察NOL1/NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2(NOL1/NOP2/Sun domain family member 2,Nsun2)表达变化,探讨Nsun2在肾脏IRI中的作用.方法 雄性C57BL/6N小鼠12只,随机分为IRI-3组、IRI-6组、IRI-24组和假手术组各3只.使用无损伤显微血管夹夹闭小鼠肾蒂使肾脏缺血30 min,随后移除血管夹恢复肾脏血流,IRI-3组、IRI-6组、IRI-24组分别再灌注3、6、24 h;假手术组仅做手术切口和缝合,不做其他处理.IRI-3组、IRI-6组和IRI-24组小鼠分别于再灌注3、6、24 h时,假手术组小鼠于再灌注24 h时检测血肌酐水平.取血后处死小鼠取左肾组织,行HE染色检测4组肾脏组织病理变化,行免疫荧光染色检测IRI-24组和假手术组肾脏组织Nsun2表达,采用Western blot法检测4组肾脏组织Nsun2、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)相对表达量.取人近端肾小管上皮HK-2细胞,分别应用0、100、200 μmol/L CoCl2处理24 h后更换正常培养基继续培养2 h,采用Western blot法检测Nsun2、Bax、Bcl-2蛋白相对表达量,确定构建IRI细胞模型的CoCl2处理最适宜浓度为200 μmol/L.取HK-2细胞分为siRNA-NC 组、siRNA-Nsun2 组,分别转染 2.5 μL 20 μmol/L 的 siRNA-NC 和 2.5 μL 20 μmol/L 的 siRNA-Nsun2,转染6 h后培养24 h,采用Western blot法检测2组细胞Nsun2蛋白相对表达量.取siRNA-NC组、siRNA-Nsun2组细胞,应用 200 μmol/L CoCl2 处理 24 h 后培养 2 h,分别为 siRNA-NC+IRI 组和 siRNA-Nsun2+IRI 组,采用 Western blot 法检测siRNA-NC组、siRNA-NC+IRI组、siRNA-Nsun2+IRI组细胞Bcl-2、Bax蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 IRI-3、IRI-6、IRI-24 组血肌酐水平[(44.44±2.96)、(49.91±5.65)、(56.41±5.13)μmol/L]均高于假手术组[(27.35±2.96)μmol/L](P＜0.05),IRI-24组高于IRI-3组(P＜0.05).假手术组肾小球及间质细胞正常,肾小管上皮细胞结构完整,IRI-3组、IRI-6组、IRI-24组肾小球及间质细胞正常,肾小管上皮细胞出现空泡和颗粒化变性、崩解以及管腔堵塞,且24 h内再灌注时间越长,病理改变越重.免疫荧光染色结果显示,Nsun2定位于细胞核,呈点状分布;IRI-24组近端肾小管上皮细胞Nsun2表达明显多于假手术组.IRI-24组肾脏组织Nsun2蛋白相对表达量(0.33±0.03)高于假手术组、IRI-3 组、IRI-6 组(0.17±0.01、0.22±0.05、0.25±0.01)(P＜0.05),IRI-6 组高于假手术组(P＜0.05);IRI-3 组、IRI-6 组、IRI-24 组肾脏组织 Bax 蛋白相对表达量(0.52±0.04、0.54±0.06、0.44±0.04)均高于假手术组(0.14±0.01)(P＜0.05),IRI-3 组、IRI-6 组均高于 IRI-24 组(P＜0.05);IRI-6 组、IRI-24 组肾脏组织 Bcl-2 蛋白相对表达量(0.17±0.08、0.03±0.02)均低于假手术组、IRI-3 组(0.39±0.13、0.34±0.07)(P＜0.05).200 μmol/L CoCl2 组细胞 Nsun2、Bax 蛋白相对表达量(0.53±0.04、0.66±0.04)均高于 0 μmol/L CoCl2 组(0.31±0.02、0.28±0.01)和 100 μmol/L CoCl2 组(0.34±0.02、0.52±0.04)(P＜0.05),Bcl-2 蛋白相对表达量(0.24±0.01)均低于0 μmol/L CoCl2 组和 100 μmol/L CoCl2 组(0.56±0.02、0.37±0.01)(P＜0.05);100 μmol/L CoCl2 组细胞 Bax 蛋白相对表达量高于 0 μmol/L CoCl2 组(P＜0.05),Bcl-2 蛋白相对表达量低于 0 μmol/L CoCl2 组(P＜0.05).siRNA-Nsun2组细胞 Nsun2 蛋白相对表达量(0.33±0.02)低于 siRNA-NC 组(0.64±0.07)(P＜0.05).siRNA-NC+IRI 组细胞 Bax蛋白相对表达量(0.61±0.03)及细胞凋亡率[(8.63±1.00)％]均高于 siRNA-NC 组[0.48±0.02、(1.93±0.55)％](P＜0.05),Bcl-2 蛋白相对表达量(0.44±0.05)低于 siRNA-NC 组(0.79±0.02)(P＜0.05);siRNA-Nsun2+IRI 组细胞Bax蛋白相对表达量(0.32±0.02)及细胞凋亡率[(5.33±1.12)％]均低于siRNA-NC+IRI组(P＜0.05),Bcl-2蛋白相对表达量(0.63±0.03)高于siRNA-NC+IRI组(P＜0.05).结论 IRI小鼠肾脏组织及IRI肾小管上皮细胞HK-2中Nsun2表达上调,下调Nsun2表达可抑制IRI肾小管上皮细胞凋亡.

缺血再灌注损伤;细胞凋亡;NOL1/NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2;小鼠;HK-2细胞

甘玉金;刘文娜;王利蒙;张丽娜;杨苗苗;曹慧霞;阎磊;王雁良;邵凤民

郑州大学人民医院河南省人民医院肾内科河南省肾脏病免疫重点实验室河南省肾病临床医学研究中心,河南郑州 450003

中华实用诊断与治疗杂志

[1]甘玉金;刘文娜;王利蒙;张丽娜;杨苗苗;曹慧霞;阎磊;王雁良;邵凤民-.NOL1/NOP2/Sun RNA甲基转移酶家族成员2在肾脏缺血再灌注损伤中的作用)[J].中华实用诊断与治疗杂志,2022(05):438-444

NOL1,Nsun2,NC+IRI,Nsun2+IRI

NOP2,Sun,甲基转移酶,肾脏缺血再灌注损伤,ischemia,reperfusion,injury,细胞模型,domain,family,member,表达变化,C57BL,6N,假手,无损伤,微血管,管夹,夹闭,后移,移除,做手术,手术切口,缝合,血肌酐,处死,肾组织,HE,病理变化,免疫荧光染色,blot,cell,lymphoma,Bcl,associated,protein,Bax,相对表达量,HK,CoCl2,白相,适宜浓度,siRNA,转染,流式细胞术,细胞凋亡率,肾小球,间质细胞,细胞结构,空泡,颗粒化,崩解,管腔,再灌注时间,病理改变,染色结果,细胞核,点状,近端肾小管上皮细胞,可抑制

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