目的 探讨长链非编码RNA-浆细胞瘤变异易位基因1/蛋白质酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子3(lnc-PVT1/JAK/STAT3)信号通路参与肺纤维化的作用机制.方法 采用不同浓度脂多糖(LPS)作用于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用CCK-8法检测细胞活性、蛋白免疫印迹法检测α-SMA的蛋白相对表达量,对LPS药物浓度进行筛选,选取LPS刺激后最适浓度的BEAS-2B建立肺纤维化体外模型;体外合成针对lnc-PVT1的3个小干扰RNA(siRNA)抑制靶点及对照siRNA,瞬时转染到BEAS-2B,用定量逆转录PCR(RT-qPCR)验证lnc-PVT1的表达,选取有效抑制靶点用于后续研究.实验分为空白对照(Con)组、LPS组、LPS+siRNA对照(LPS+siNC)组和LPS+siPVT1组.瞬时转染siPVT1及siRNA对照进入BEAS-2B后,用10μg/mL LPS刺激24 h,用CCK-8法检测细胞活力,划痕检测细胞迁移,RT-qPCR检测lnc-PVT1 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α含量,蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、STAT3和p-STAT3蛋白表达.结果 与Con组相比,10μg/mL LPS处理BEAS-2B细胞后细胞增殖能力增强,α-SMA蛋白相对表达量也上调(P均<0.01);与LPS组相比,敲低lnc-PVT1可抑制LPS诱导的BEAS-2B细胞增殖和细胞迁移(P均<0.01),降低IL-6、IL-1β和TNF-α等炎症因子的含量(P均<0.01),降低α-SMA的mRNA和蛋白表达及磷酸化STAT3蛋白相对表达量(P均<0.01),而STAT3蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05).结论 敲低lnc-PVT1可改善LPS诱导的BEAS-2B细胞纤维化过程,可能与lnc-PVT1调控JAK/STAT3信号通路有关.

浆细胞瘤变异易位基因1;肺纤维化;蛋白质酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子3;炎症因子

518109 深圳,深圳市龙华区人民医院呼吸内科

[1]卓超洲;沈观乐;雷朝君;余瑞林;梁杰;高妩媚;魏艾-.长链非编码RNA-PVT1介导JAK/STAT3信号通路对肺纤维化的研究)[J].新医学,2022(07):496-502

LPS+siRNA,LPS+siPVT1,siPVT1

长链非编码,JAK,STAT3,肺纤维化,浆细胞瘤,易位,酪氨酸激酶,信号转导和转录激活因子,lnc,脂多糖,肺上皮细胞,BEAS,2B,CCK,细胞活性,蛋白免疫印迹法,SMA,白相,相对表达量,药物浓度,最适浓度,体外模型,小干扰,转染,逆转录,qPCR,空白对照,Con,LPS+siNC,照进,细胞活力,划痕检测,细胞迁移,上清液,平滑肌肌动蛋白,细胞增殖能力,敲低,可抑制,磷酸化,细胞纤维化

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