[目的]通过构建脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮(QGDY)的抗炎作用及其机制.[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响.分别建立抗氧化反应元件(ARE)和核因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响.建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型,将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组(1、10、100μg/mL),倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κB p65(p65)核移位情况;采用Western blot法检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)和p65蛋白表达情况.[结果]0.01～10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1～10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响.初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用.0.01～100μg/mL清感冬饮干预24 h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用.与模型组相比,1～100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10～100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达.[结论]清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关.

清感冬饮;RAW264.7巨噬细胞;脂多糖;抗炎;NF-κB/iNOS/NO信号通路

苏瑞;卢佳;席智男;王佳宝;宋新波;张晗;苗琳

天津中医药大学中医药研究院,天津 301617;天津中医药大学方剂学教育部重点实验室,天津301617;天津中医药大学组分中药国家重点实验室,天津 301617;天津中医药大学,天津 301617;天津现代创新中药科技有限公司,天津 300392

天津中医药大学学报

[1]苏瑞;卢佳;席智男;王佳宝;宋新波;张晗;苗琳-.清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症)[J].天津中医药大学学报,2022(06):737-745

清感冬饮,QGDY

iNOS,LPS,RAW264,巨噬细胞,脂多糖,细胞炎症模型,抗炎作用,CCK,LDH,HEK293T,细胞活力,漏出,抗氧化反应元件,ARE,核因子,双荧光素酶报告系统,细胞体,体外炎症模型,空白对照,高剂量,倒置,显微镜下,形态差异,Griess,上清,qRT,免疫荧光法,察核,p65,移位,blot,一氧化氮合酶,启动子,抗氧化作用,细胞毒性作用,总蛋白,核蛋白,可抑制,促炎因子,放有

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