目的 探讨野生型斑马鱼白细胞介素10(IL-10)在胚胎早期发育过程中的表达特点.方法 在美国国家生物信息技术中心(NCBI)数据库中分别查询人类、小鼠及斑马鱼染色体中IL-10的基因位置,与Ensem-ble数据库中的数据进行比对,采用软件分子进化遗传分析软件(MEGA X)绘制系统进化树;收集3组72受精后小时(hpf)斑马鱼胚胎、30枚/组,提取总RNA(Total RNA)及合成互补脱氧核糖核酸(cDNA),构建斑马鱼重组质粒pCS2+-IL-10,体外转录合成地高辛标记的IL-10反义RNA探针;分别收集4、6、9、12、18、24、48及72 hpf的斑马鱼胚胎75枚(25枚/组、3组),采用全胚胎原位杂交技术检测斑马鱼胚胎不同发育时间点IL-10表达及分布情况.结果 野生型斑马鱼IL-10基因与人类IL-10基因相似度较高,且在进化过程中相对保守;限制性内切酶双酶切重组质粒及测序结果显示,重组质粒构建无误;全胚胎原位杂交结果显示,4～12 hpf野生型斑马鱼胚胎中未观察到阳性杂交信号,18 hpf野生型斑马鱼胚胎中后部中间细胞群观察到IL-10阳性杂交信号,24～72 hpf野生型斑马鱼胚胎胚胎头部区域IL-10广泛表达,头部背侧、心脏、眼眶以及卵黄囊背侧部位的信号尤为明显.结论 斑马鱼IL-10在进化过程中具有相对保守性,在早期胚胎发育过程中IL-10有不同程度的表达,提示IL-10在斑马鱼胚胎早期发育中发挥重要作用.

斑马鱼;白细胞介素10;原位杂交;细胞因子类;胚胎早期发育;重组质粒构建

赵砚驰;李化;李丹;孔鹏;张乙进;吴洁玲;莫大双;舒莉萍

贵州医科大学 基础医学院 免疫学教研室,细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,贵州省再生医学重点实验室,省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州 贵阳 550004;中国医学科学院 成体干细胞转化研究重点实验室,贵州 贵阳 550004

贵州医科大学学报

[1]赵砚驰;李化;李丹;孔鹏;张乙进;吴洁玲;莫大双;舒莉萍-.斑马鱼早期胚胎发育过程中IL-10表达的特点)[J].贵州医科大学学报,2022(09):1000-1006,1013

Ensem,pCS2+

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