背景 近年来研究发现细菌可分泌细菌外囊泡(bacteria extracellular vesicles,BEVs),并发挥重要的生物学功能.工程化修饰细菌外囊泡从而进行药物递送载体构建、新型疫苗研发已成为研究新热点.然而目前缺乏对不同来源细菌外囊泡相关特性的比较研究.目的 探索以金葡菌为代表的革兰阳性菌和以大肠埃希菌为代表的革兰阴性菌来源细菌外囊泡的理化性质和生物学特性.方法 本研究通过切向流过滤系统结合超速离心法提取金葡菌和大肠埃希菌的细菌外囊泡,并通过电镜形貌、粒径、电位、蛋白产量、免疫细胞激活情况对金葡菌和大肠埃希菌细菌外囊泡进行比较.结果 透射电镜下细菌外囊泡呈现杯状、茶托状的双层膜结构,大小为20～300 nm;金葡菌外囊泡37.84～396.10 nm,大肠埃希菌外囊泡13.54～78.82 nm;金葡菌和大肠埃希菌的细菌外囊泡带负电荷,分别为(-19.7±0.17)mV和(-24.1±2.55)mV;金葡菌和大肠埃希菌外囊泡的蛋白产量分别为(0.94±0.04)mg 和(1.71±0.19)mg;颗粒数分别为 4.00×1011(±1×1010)/mL 和 9.47×1011(±2.52×1010)/mL;颗粒数/蛋白量比值分别为5.59×1011(±1.6×1010)和4.24×1011(±6.43×1010);加入金葡菌囊泡后,巨噬细胞系RAW264.7中CD86阳性细胞占比为20.23％,比对照组(PBS组)升高45.9倍(P＜0.001);CD206阳性细胞占比为4.5％,相比对照组升高34.6倍(P＜0.001).加入大肠埃希菌外囊泡后RAW264.7的CD86阳性细胞占比为11.16％,相比对照组升高25.4倍(P＜0.001);CD206阳性细胞占比为2.09％,相比对照组升高16.1倍(P＜0.05).结论 本研究通过切向流过滤系统结合超速离心法成功提取出金葡菌和大肠埃希菌的细菌外囊泡,且金葡菌外囊泡直径略大于大肠埃希菌外囊泡,Zeta电位相比大肠埃希菌略高.同等培养条件下,金葡菌外囊泡产量比大肠埃希菌外囊泡低,但对免疫细胞的激活能力更强.

超速离心;金葡菌外囊泡;大肠埃希菌外囊泡;生物学功能

于海宽;冯韬锦;王端阳;姜矞恒;陈铭;李毅;尹鹏滨;张里程;唐佩福;刘蜀彬

解放军医学院,北京 100853;解放军总医院第四医学中心骨科医学部,北京 100853;国家骨科与运动康复临床医学研究中心骨科,北京 100853;哈尔滨医科大学附属第二医院 骨科,黑龙江哈尔滨 150086;解放军南部战区总医院 骨科,广东广州 510010;解放军总医院第五医学中心骨科,北京 100071

解放军医学院学报

[1]于海宽;冯韬锦;王端阳;姜矞恒;陈铭;李毅;尹鹏滨;张里程;唐佩福;刘蜀彬-.金葡菌和大肠埃希菌细菌外囊泡的生物学特性比较研究)[J].解放军医学院学报,2022(12):1266-1271

BEVs,切向流过滤,金葡菌外囊泡,大肠埃希菌外囊泡

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