典型文献
FAH/GSTZ1双基因突变肝细胞模型的建立
文献摘要：
目的 采用CRISPR/Cas9技术敲除人LO2肝细胞系的谷胱甘肽S-转移酶Z1(GSTZ1)和延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH),探讨GSTZ1和FAH基因敲除对于肝细胞生长、增殖、迁移的影响.方法 分别构建靶向GSTZ1和FAH基因的向导RNA(sgRNA)载体,与CRISPR/Cas9载体共转染LO2细胞,通过有限稀释法筛选,基因型鉴定和Western blot实验证实获得的FAH和GSTZ1基因的单基因敲除和双基因敲除三种细胞株.进一步对敲除细胞株表型进行鉴定,通过平板克隆形成实验检测基因敲除肝细胞克隆形成能力;CCK8实验和EdU分析实验测试细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力.结果 成功获得GSTZ1-/-、FAH-/-和FAH-/-/GSTZ1-/-三种基因敲除细胞株.相比于野生型细胞,三种细胞株在增殖能力,克隆形成能力、迁移能力均有显著增加,其中FAH敲除对细胞表型的影响相对较小,GSTZ1敲除对肝细胞活性提高最强,双基因敲除细胞活性处于两个单基因敲除之间.结论 我们首次成功建立了FAH/GSTZ1双基因突变肝细胞株,为酪氨酸代谢通路研究和Ⅰ型遗传性酪氨酸血症治疗研究提供了一个新型的细胞模型.
文献关键词：
CRISPR/Cas9技术;双基因敲除;GSTZ1;FAH;LO2细胞系
中图分类号：
作者姓名：
刘艳;顾鹏;叶行;梁春锦;关雅今;张映辉;邹庆剑;顾为望
作者机构：
五邑大学生物科技与大健康学院,广东 江门 529020;华南生物医药大动物模型研究院,广东省医学大动物模型重点实验室,广东 江门 529728;南方医科大学实验动物管理中心暨比较医学研究所,广州 510515;江门市大健康国际创新研究院,广东 江门 592040
文献出处：
引用格式：
[1]刘艳;顾鹏;叶行;梁春锦;关雅今;张映辉;邹庆剑;顾为望-.FAH/GSTZ1双基因突变肝细胞模型的建立)[J].中国比较医学杂志,2022(08):71-78
A类：
GSTZ1
B类：
FAH,基因突变,细胞模型,CRISPR,Cas9,LO2,肝细胞系,谷胱甘肽,转移酶,延胡索,酸水解,水解酶,细胞生长,向导,sgRNA,共转染,有限稀释,稀释法,基因型鉴定,blot,单基因,双基因敲除,细胞株,实验检测,细胞克隆形成,克隆形成能力,CCK8,EdU,实验测试,细胞增殖能力,划痕实验,细胞迁移能力,野生型,细胞表型,肝细胞活性,酪氨酸,酸代谢,代谢通路,遗传性,酸血症,治疗研究
AB值：
0.243178
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