目的 检测肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA)-135b?5p的表达水平变化,探究其临床应用价值及其参与RCC发生、发展的作用机制.方法 采用荧光定量逆转录PCR(qRT?PCR)检测2022年1月至6月于东部战区总医院泌尿外科就诊且经病理学确诊的60例RCC患者及60例健康人对照血清miR?135b?5p的表达水平变化,评估其对于RCC患者的临床辅助筛查价值.体外培养RCC细胞系(ACHN、Caki?1)和正常肾小管上皮细胞系(HK?2),qRT?PCR检测细胞及细胞分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)中miR?135b?5p的表达水平;进一步应用生物信息学分析、EVs与细胞共培养、细胞功能等方法探究EVs miR?135b?5p参与RCC的初步作用分子机制.结果 RCC患者血清miR?135b?5p水平[6.932(5.524,9.964)]与健康人对照[5.534(4.373,6.555)]比较显著升高(U=1042,P<0.01).血清miR?135b?5p水平对于RCC筛查的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.711(95％CI:0.619～0.802).ACHN和Caki?1细胞中miR?135b?5p水平较正常HK?2细胞中的表达倍数显著明显升高(分别升高了7.821倍和1.919倍.P值分别为0.0003和0.0001);同时,ACHN和Caki?1 EVs中miR?135b?5p水平较HK?2 EVs中的表达倍数亦显著增高(分别升高了3.783倍和2.627倍.P值分别为0.0001和0.0004).生物信息学分析结合文献调研显示,miR?135b?5p可能通过调控潜在靶基因血管生成素样蛋白4(angiopoietin?like protein 4,ANGPTL4)的表达而参与血管生成.RCC EVs与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)共培养结果显示,RCC细胞分泌的富含miR?135b?5p EVs在与HUVEC温育的不同时间点(4 h、6 h和8 h)均可明显促进内皮细胞成环,差异具有统计学意义(P值分别为0.0112,0.0057,0.0017).Western blot结果显示,mimics组ANGPTL4蛋白的表达水平为(0.616±0.003),较NC组(1.00±0.05)显著降低,差异具有统计学意义(t=12.44,P=0.0002).进一步分析发现与NC组相比,HUVEC中miR?135b?5p过表达组在连续观察时间内(2 h、4 h、6 h和8 h)的成环数明显增加(P值分别为0.0001,0.0001,0.0032,0.0095).结论 RCC患者血清、细胞系及细胞分泌的EVs miR?135b?5p表达水平均显著升高,血清miR?135b?5p水平测定对于RCC具有较高的临床辅助筛查价值,RCC细胞分泌EVs miR?135b?5p可通过调控ANGPTL4的表达,参与血管生成.

肾细胞癌;miR-135b-5p;血管生成素样蛋白4;血管生成

王榕;王成;陈阳;丁小宇;张春妮;张辰宇;汪俊军

南京医科大学金陵临床医院&东部战区总医院检验科,南京210002;南京大学生命科学院,南京210046

临床检验杂志

[1]王榕;王成;陈阳;丁小宇;张春妮;张辰宇;汪俊军-.肾细胞癌患者血清miR-135b?5p表达变化的价值及功能)[J].临床检验杂志,2022(12):912-917

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