利用表观遗传学和代谢组学理念和方法,探讨阐明野菊花活性部位(Chrysanthemi indici C,CIC)抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)整体作用分子机制.CCK-8和乙肝抗原试剂盒检测CIC对HepG2.2.15细胞增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B envelope antigen,HBeAg)、乙型肝炎病毒核酸(hepatitis B virus-deoxyribonucleic acid,HBV-DNA)的抑制作用;ELISA 法检测 CIC 对DNA 甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)/去甲基转移酶 2(ten-eleven-translocation-2,TET2)平衡关系的影响;利用Illumina 850K甲基化芯片、焦磷酸测序和qPCR技术,通过GO、KEGG等分析,确定CIC抗HBV的作用途径和靶点;80％甲醇提取细胞代谢物,LC-MS等代谢组学方法检测差异代谢物、差异代谢途径及细胞微环境的变化.结果表明,CIC对HepG2.2.15细胞增殖和HBsAg、HBeAg、HBV-DNA有明显的抑制作用,下调DNA甲基转移酶 1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、DNA 甲基转移酶 3a(DNA methyltransferase 3a,DNMT3a)、DNA 甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b,DNMT3b),上调 TET2,恢复 DNMTs/TET2平衡;DNA 甲基化测序结果表明,CIC 抗乙肝病毒的作用靶基因有磷脂酶C-γ2(phospholipase C gamma 2,PLCG2)、磷脂肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)、1 酰基甘油 3 磷酸 O 酰基转移酶 2(1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 2,AGPAT2)、5-羟色胺受体 2B(5-hydroxytryptamine receptor 2B,HTR2B)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF),主要涉及脂质代谢、瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)通道炎症介导调节、磷脂酶D信号、糖尿病并发症中晚期糖基化终产物-AGE 受体(advanced glycation end product-receptor for AGE,AGE-RAGE)信号等通路;代谢组学研究表明,CIC可以显著影响脂肪酸代谢,同时对细胞微环境中酚酸、生物碱、脂质类代谢物影响较大.研究结果提示,野菊花活性部位抗乙肝病毒作用机制可能是通过调节表观遗传表达平衡而调控相关炎症通路、免疫通路、脂代谢等多途径、多靶点的协同作用,并恢复细胞微环境平衡.

野菊花;活性部位CIC;抗乙肝病毒;DNA甲基转移酶/去甲基转移酶2;表观遗传学;代谢组学

郑州大学药学院,河南郑州450001

[1]张芳平;王云雨;程鑫涛;王东浩;李英梅;刘藤藤;李爽;郑一超;符玲;毕跃峰-.基于表观遗传学和代谢组学的野菊花活性部位抗乙肝病毒整体作用分子机制研究)[J].药学学报,2022(08):2352-2363

Chrysanthemi,indici,acylglycerol,HTR2B

表观遗传学,代谢组学,野菊花,活性部位,抗乙肝病毒,CIC,hepatitis,virus,HBV,CCK,试剂盒,HepG2,乙型肝炎病毒表面抗原,surface,antigen,HBsAg,envelope,HBeAg,乙型肝炎病毒核酸,deoxyribonucleic,acid,methyltransferases,DNMTs,去甲基转移酶,eleven,translocation,TET2,平衡关系,Illumina,850K,焦磷酸测序,qPCR,作用途径,醇提,细胞代谢,差异代谢物,代谢途径,细胞微环境,DNMT1,DNMT3a,DNMT3b,甲基化测序,靶基因,磷脂酶,phospholipase,gamma,PLCG2,肌醇,phosphoinositide,kinase,regulatory,subunit,PIK3R3,酰基,phosphate,acyltransferase,AGPAT2,羟色胺,hydroxytryptamine,receptor,神经生长因子,nerve,growth,NGF,脂质代谢,感受器,transient,potential,TRP,炎症介导,导调,糖尿病并发症,中晚期,晚期糖基化终产物,advanced,glycation,end,product,RAGE,组学研究,脂肪酸代谢,酚酸,生物碱,炎症通路,脂代谢,多途径,多靶点

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