典型文献
利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系
文献摘要：
目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因编辑的长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)细胞系,为构建新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(se-vere acute respiratory syndrome coronavirus type 2,SARS-CoV-2)不易感猪模型提供实验材料.方法:①利用生物信息学方法对大鼠和鸡的ACE2氨基酸序列进行比对,将大鼠ACE2与SARS-CoV-2 S蛋白相互作用的关键氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计嵌合的ACE2基因并构建ACE2基因敲入供体.②设计并合成靶向猪ACE2基因的sgRNA,克隆到pX330载体上构建ACE2基因打靶载体.③将ACE2打靶载体和ACE2基因敲入供体以及Neomycin抗性质粒共转染至长白猪PFF细胞,筛选G418抗性单细胞克隆并进行测序鉴定.结果:根据氨基酸序列比对结果,将大鼠ACE2蛋白的第19、31、34、35、42、353、354位氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计合成了嵌合的ACE2基因.G418抗性单细胞克隆基因型分析结果显示获得了阳性单细胞克隆.结论:利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源ACE2基因敲除、嵌合ACE2敲入的长白公猪PFF细胞系,为构建SARS-CoV-2不易感猪模型奠定了基础.
文献关键词：
ACE2;CRISPR/Cas9;SARS-CoV-2;猪胎儿成纤维细胞
中图分类号：
作者姓名：
张成霖;方斌;刘晓蕊;李琳;王盈;杨海元;戴一凡
作者机构：
南京医科大学江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166
文献出处：
引用格式：
[1]张成霖;方斌;刘晓蕊;李琳;王盈;杨海元;戴一凡-.利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系)[J].南京医科大学学报（自然科学版）,2022(11):1499-1506
A类：
B类：
CRISPR,Cas9,技术构建,ACE2,基因修饰,猪胎儿成纤维细胞,细胞系,基因编辑技术,血管紧张素转换酶,angiotensin,converting,enzyme,长白猪,porcine,fetal,fibroblast,PFF,严重急性呼吸综合征冠状病毒,se,vere,acute,respiratory,syndrome,coronavirus,type,SARS,CoV,实验材料,利用生物,生物信息学方法,蛋白相互作用,氨基酸残基,嵌合,基因敲入,供体,并合,sgRNA,pX330,基因打靶,Neomycin,质粒,共转染,G418,单细胞,细胞克隆,氨基酸序列比对,设计合成,基因型分析,基因敲除,公猪
AB值：
0.324986
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
