典型文献
APOBEC3B调控葡萄膜黑色素瘤复制应激的研究
文献摘要：
目的·研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B,APOBEC3B)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)中的生物学功能以及对药物治疗敏感性的影响.方法·应用免疫组织化学染色和Western blotting,分别检测眼部黑色素瘤[UM和结膜黑色素瘤(conjunctival melanoma,CM)]组织和细胞中APOBEC3B蛋白的表达水平.通过检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析UM中APOBEC3B表达水平与预后的关联.使用CRISPR-Cas9质粒APOBEC3B-sgRNA敲除UM细胞系OMM2.3中APOBEC3B基因,构建APOBEC3B敲除的OMM2.3稳转细胞系sgAPOBEC3B以及对照细胞系Vector;并通过克隆形成实验,探索APOBEC3B敲除对OMM2.3细胞增殖的影响.同时,通过APOBEC3B-shRNA和空载质粒建立APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞shAPOBEC3B和对照细胞shCtrl,对其进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq),检测差异基因,并通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)揭示APOBEC3B调控的下游通路.通过免疫荧光染色鉴定下游通路的关键蛋白.通过应用通路靶向药物处理,检测APOBEC3B对UM药物治疗敏感性的影响.结果·免疫组织化学染色结果表明眼部黑色素瘤(UM和CM)组织相较于良性色素痣组织APOBEC3B表达更高.Western blotting也表明包括OMM2.3细胞在内的大多数眼部黑色素瘤细胞相较于正常对照细胞(视网膜色素上皮细胞)APOBEC3B蛋白表达水平更高.并且TCGA数据库分析表明,APOBEC3B高表达的UM患者总生存期(P=0.032)和无病生存期(P=0.000)更短.然而APOBEC3B敲除并不影响OMM2.3细胞克隆形成的能力,APOBEC3B敲低也没有造成细胞周期的显著改变.shAPOBEC3B和shCtrl细胞系的RNA-seq差异基因富集分析结果显示,APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞的复制应激相关通路,并且热图分析也显示APOBEC3B敲低后DNA复制应激相关通路基因表达发生改变.免疫荧光染色结果显示,APOBEC3B敲低后复制应激通路关键靶标磷酸化的复制蛋白A 32 kDa亚基(replication protein A 32 kDa subunit,RPA32)水平降低.在对APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞和对照细胞的药物敏感性实验中,发现相较于shAPOBEC3B细胞,shCtrl细胞对细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)抑制剂的敏感性更高.结论·APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞复制应激相关通路,且APOBEC3B表达的OMM2.3细胞对CHK1抑制剂的处理更为敏感.
文献关键词：
载脂蛋白B Mrna编辑酶催化亚基3B(APOBEC3B);葡萄膜黑色素瘤;复制应激;细胞周期检测点激酶1 (CHK1)抑制剂
中图分类号：
作者姓名：
宗春燕;何杰;张哲;贾仁兵;沈键锋
作者机构：
上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科,上海市眼眶病眼肿瘤重点实验室,上海 200011
文献出处：
引用格式：
[1]宗春燕;何杰;张哲;贾仁兵;沈键锋-.APOBEC3B调控葡萄膜黑色素瘤复制应激的研究)[J].上海交通大学学报（医学版）,2022(08):1034-1044
A类：
APOBEC3B,OMM2,sgAPOBEC3B,shAPOBEC3B,RPA32,细胞周期检测点激酶
B类：
葡萄膜黑色素瘤,复制应激,载脂蛋白,酶催化,催化亚基,apolipoprotein,editing,enzyme,catalytic,subunit,uveal,melanoma,UM,生物学功能,对药,治疗敏感性,免疫组织化学染色,blotting,眼部,结膜,conjunctival,CM,癌症基因组图谱,Cancer,Genome,Atlas,TCGA,CRISPR,Cas9,质粒,sgRNA,敲除,细胞系,Vector,shRNA,空载,敲低,shCtrl,转录组测序,sequencing,差异基因,基因集富集分析,gene,set,enrichment,analysis,GSEA,免疫荧光染色,定下,关键蛋白,靶向药物,染色结果,明眼,性色,色素痣,数眼,黑色素瘤细胞,正常对照,视网膜色素上皮细胞,蛋白表达水平,数据库分析,总生存期,无病生存期,细胞克隆形成,基因富集分析,相关通路,热图分析,路基,关键靶标,磷酸化,kDa,replication,平降,药物敏感性实验,cell,cycle,checkpoint,kinase,CHK1,Mrna
AB值：
0.236787
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