典型文献
一种人B淋巴细胞表面抗原的重组表达和纯化
文献摘要：
人源CD20作为B淋巴细胞表面特异性表达的膜蛋白,可以作为B淋巴细胞瘤免疫治疗的有效靶点.通过分子克隆引物设计,将CD20的胞外区以重复串联的方式克隆到pET28a载体上,两者之间通过Linker连接区(-GSSGGSSG-)连接,构建表达载体pET28a-Bi20.测序正确后转化至大肠杆菌Transetta(DE3)中重组表达,优化表达条件为当菌液OD600为0.6～0.8时,以IPTG终浓度1 mmol/L,37℃诱导5 h.表达产物带有C端6个组氨酸的亲和标签,以包涵体形式表达.通过包涵体洗涤条件优化,变性条件下的镍亲和层析纯化,透析复性条件的摸索和优化,最终获得纯度大于95％的可溶CD20胞外区同源二聚体Bi20,建立在大肠杆菌表达系统中规模化量产CD20胞外区多肽的方法.经Western Blot和ELISA检测证实纯化复性后CD20胞外区多肽Bi20具有良好的免疫原性.
文献关键词：
人源B淋巴细胞表面抗原;细胞治疗;重组表达;连接区;包涵体变复性
中图分类号：
作者姓名：
常卿;俞敏达;李文奇
作者机构：
清华大学生命科学学院 蛋白质研究技术中心,北京 100084;清华大学结构生物学高精尖创新中心,北京 100084;北京市第四中学国际校区,北京 100031
文献出处：
引用格式：
[1]常卿;俞敏达;李文奇-.一种人B淋巴细胞表面抗原的重组表达和纯化)[J].生物学杂志,2022(06):20-24
A类：
GSSGGSSG,Bi20,包涵体变复性
B类：
细胞表面,表面抗原,重组表达,CD20,特异性表达,膜蛋白,免疫治疗,有效靶点,分子克隆,引物设计,胞外区,pET28a,Linker,连接区,建表,表达载体,Transetta,DE3,菌液,OD600,IPTG,达产,组氨酸,洗涤,条件优化,亲和层析,层析纯化,同源二聚体,大肠杆菌表达,表达系统,规模化量产,多肽,Blot,免疫原性,细胞治疗
AB值：
0.341253
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