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双氢青蒿素对铜绿假单胞菌感染的角膜上皮细胞的清除作用与机制
文献摘要：
目的 探讨双氢青蒿素(DHA)对铜绿假单胞菌感染的角膜上皮细胞的清除作用与机制.方法 将热灭活铜绿假单胞菌(MOI=1:100)感染5 h后的人角膜上皮细胞系HCEC细胞分为空白组、不同浓度DHA组(生理盐水预处理30 min后,分别加入10、20、40μmol·L-1 DHA培养24 h)、氯喹(CQ)组(5μmol·L-1 CQ预处理30 min后,加入生理盐水培养24 h)、DHA+CQ组(5μmol·L-1 CQ预处理30 min后,加入40μmol·L-1 DHA培养24 h),采用Western Blot法检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62、核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子α(IκBα)和p-IκBα蛋白表达水平.选取50只6～8周SPF级C57BL6J雌性小鼠构建铜绿假单胞菌角膜炎动物模型,分为假手术组(n=5)、模型组(n=25)、CQ组(n=5)、雷帕霉素组(n=5)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(n=5)和DHA组(n=5),除假手术组外,其余5组小鼠在眼表滴加10μL铜绿假单胞菌菌液(107个·mL-1);CQ组、雷帕霉素组、3-MA组、DHA组分别于术前1 d起每日分别用CQ(30μmol·L-1)、雷帕霉素(3μmol·L-1)、3-MA(3 mmol·L-1)、DHA(40μmol·L-1)点眼6次,假手术组和模型组用等体积生理盐水代替;检测各组小鼠模型角膜组织载菌量.结果 10、20、40μmol·L-1 DHA处理均可显著增加HCEC细胞中LC3B-II/LC3B-I蛋白表达比值与IκBα蛋白表达水平,显著降低P62蛋白与p-IκBα蛋白表达水平,且呈剂量依赖性(均P<0.05);分离胞核和胞质蛋白,DHA处理显著上调细胞质RelA/p65蛋白表达水平并下调核RelA/p65蛋白表达水平(均P<0.05).与空白组相比,40μmol·L-1 DHA组LC3B-II/LC3B-I蛋白表达比值显著升高,CQ组LC3B-II/LC3B-I蛋白表达比值显著降低(均P<0.05);而DHA+CQ组LC3B-II/LC3B-I蛋白表达比值显著低于DHA组(P<0.05).TNF-α(100 ng·mL-1)预处理可显著降低DHA组LC3B-II/LC3-I蛋白比值(P<0.05).在建模24 h后,CQ组和3-MA组小鼠角膜载菌量较假手术组显著增加(均P<0.05),而雷帕霉素组和DHA组小鼠角膜载菌量与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 DHA可通过抑制NF-κB激活进而诱导自噬的机制促进角膜上皮细胞清除铜绿假单胞菌.
文献关键词：
双氢青蒿素;铜绿假单胞菌;角膜炎;自噬;NF-κB;动物;实验;小鼠
中图分类号：
作者姓名：
汪孝军;喻福娟;阿智;肖崇雅
作者机构：
阿坝藏族羌族自治州人民医院眼科,四川 阿坝藏族羌族自治州,624000
文献出处：
引用格式：
[1]汪孝军;喻福娟;阿智;肖崇雅-.双氢青蒿素对铜绿假单胞菌感染的角膜上皮细胞的清除作用与机制)[J].南昌大学学报（医学版）,2022(02):31-37
A类：
DHA+CQ
B类：
双氢青蒿素,铜绿假单胞菌感染,角膜上皮细胞,清除作用,作用与机制,热灭活,MOI,细胞系,HCEC,生理盐水,别加,氯喹,水培,Blot,微管,轻链,P62,核因子,抑制因子,蛋白表达水平,SPF,C57BL6J,雌性小鼠,角膜炎,动物模型,假手,雷帕霉素,腺嘌呤,MA,眼表,菌液,小鼠模型,载菌量,LC3B,II,达比,剂量依赖,量依赖性,调细,细胞质,RelA,p65,调核,自噬,除铜
AB值：
0.197549
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