目的 体外实验探究黄芪补肾活血汤通过HIF1α-Smad/Runx2/Osterix信号轴治疗乳腺癌骨转移的作用机制.方法 采用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法检测细胞活力,观察黄芪补肾活血汤(0、20、40 mg·mL-1)对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和活力的影响;迁移实验检测黄芪补肾活血汤对乳腺癌细胞MCF-7迁移水平的影响;Transwell实验检测黄芪补肾活血汤对乳腺癌细胞MCF-7侵袭水平的影响;流式细胞术检测黄芪补肾活血汤对乳腺癌细胞MCF-7凋亡作用的影响;共培养乳腺癌细胞MCF-7、成骨细胞MC3T3-E1后蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测黄芪补肾活血汤对共培养后的成骨细胞MC3T3-E1中缺氧诱导因子-1α(HIF1α)、Smad家族成员1(Smad1)、Smad家族成员5(Smad5)、Runt相关转录因子2(Runx2)以及锌指转录因子(Osterix)的蛋白表达情况的影响.结果 体外实验中,CCK-8法显示,与control组相比,20、40 mg·mL-1质量浓度的黄芪补肾活血汤干预MCF-7细胞48 h后能不同程度的降低MCF-7细胞的增殖和细胞活力,呈剂量依赖性.划痕实验表明,与control组相比,黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组细胞迁移率明显降低(P<0.01),呈剂量依赖性.Transwell检测结果显示,与control组相比,黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组穿膜细胞数明显减少(P<0.001),呈剂量依赖性.流式细胞术检测结果显示,与control组相比,黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组凋亡率明显升高(P<0.001),呈剂量依赖性.平板克隆实验结果显示,黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组的细胞克隆个数明显少于control组(P<0.05),呈剂量依赖性.EDU增殖实验显示,与control组相比,黄芪补肾活血汤(20 mg·mL-1、40 mg·mL-1)组细胞阳性率明显降低(P<0.05),呈剂量依赖性.Western blot实验表明,与control组比较,不同质量浓度的黄芪补肾活血汤作用于成骨细胞MC3T3-E1后,HIF1α、Osterix蛋白相对表达水平降低(P<0.01),Smad1、Smad5、Runx2蛋白表达升高(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 黄芪补肾活血汤通过HIF1α-Smad/Runx2/Osterix信号轴剂量依赖性抑制乳腺癌细胞MCF-7活力,通过HIF1α靶点改善肿瘤缺氧微环境,通过Osterix靶点抑制肿瘤血管生成和癌细胞迁移;并通过Smad1、Smad5、Runx2等靶点等促进骨髓间充质细胞成骨分化、成熟,保护骨质,促进新骨形成,抑制并缓解骨转移.

乳腺癌;骨转移;黄芪补肾活血汤;HIF1α-Smad/Runx2/Osterix信号轴;作用机制

张梦棣;时光喜;浦冬青;冯丹丹;李静蔚

山东中医药大学中医学院 济南 250000;山东中医药大学第一临床学院 济南 250000;山东中医药大学附属医院 济南 250000

世界科学技术-中医药现代化

[1]张梦棣;时光喜;浦冬青;冯丹丹;李静蔚-.基于HIF1α-Smad/Runx2/Osterix信号轴探讨黄芪补肾活血汤治疗乳腺癌骨转移的作用机制)[J].世界科学技术-中医药现代化,2022(12):4671-4680

黄芪补肾活血汤,骨髓间充质细胞

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