目的 探讨γ-分泌酶抑制剂N-[N-(3,5-二氟苯乙酰丙烯基)]-s-苯甘氨酸叔丁基酯(DAPT)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导神经干细胞(NSCs)分化的作用及对Notch通路的影响.方法 原代培养来自大鼠前脑组织的NSCs,根据处理措施将NSCs分为溶剂对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1处理细胞,浓度为5ng/L)和DAPT干预组(5 ng/LTGF-β1基础上加入1或10 μmol/LDAPT).细胞培养 3、8、24 和 48h 后,real-time RT-PCR 检测Notch 信号关键分子 Notch1 和 Jagged1 mRNA的表达;Western Blot检测星形胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及NSCs标志物-巢蛋白(Nestin)的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、GFAP及Nestin的表达.结果 TGF-β1处理后,可加速诱导NSCs的分化.NSCs标记物GFAP的表达呈现时间依赖性,早期并不表达,在8 h后GFAP开始表达,并随时间延长而表达增加.而Nestin早期明显表达,但8 h后表达明显下调,这提示(TGF-β1)作用8 h后可诱导NSCs向星形胶质细胞转化.深入研究显示,Notch1和Jagged1也在TGF-β1作用8h后表达逐渐升高,这提示TGF-β1介导星形胶质细胞转化过程中,Notch信号可能被激活进而参与了此过程.应用DAPT处理后,GFAP表达在8 h与对照组相比无明显差异,而在48h后逐渐下降;伴随着Notch1和Jagged1表达的下调,提示DAPT作用后,NSCs向星形胶质细胞转化被抑制,这与Notch信号活性的下降有关.结论 TGF-β1可诱导了 NSCs向星形胶质细胞转化,并且具有时间依赖性;其机制可能与Notch信号的活化有关.DAPT的干预可封闭Notch信号,进而抑制TGF-β1介导NSCs向星形胶质细胞分化.

神经干细胞;Notch信号;DAPT;TGF-β1;分化

周庆忠;冯晓兰;何萍;张戈;赵茂;白永恒;冯大雄

646000四川泸州,西南医科大学附属医院骨科;646000四川泸州,西南医科大学附属医院放射科;610000成都,成都中医药大学附属医院药剂科;646000四川泸州,西南医科大学附属第四医院骨科;646000四川泸州,叙永县人民医院骨科;325000浙江温州,浙江省胰腺肝脏危重性疾病诊治新技术研究重点实验室

中华临床医师杂志（电子版）

[1]周庆忠;冯晓兰;何萍;张戈;赵茂;白永恒;冯大雄-.封闭Notch信号影响神经干细胞分化的体外研究)[J].中华临床医师杂志（电子版）,2022(06):579-587

LTGF,LDAPT

细胞分化,体外研究,酶抑制剂,苯乙,苯甘氨酸,叔丁基,转化生长因子,诱导神经干细胞,NSCs,原代培养,自大,前脑,脑组织,处理措施,5ng,细胞培养,48h,real,关键分,Notch1,Jagged1,Blot,星形胶质细胞,胶质纤维酸性蛋白,GFAP,巢蛋白,Nestin,细胞免疫,免疫荧光染色法,标记物,表达呈现,时间依赖性,细胞转化,导星,转化过程

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