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基于探针底物法的高效液相色谱-串联质谱法测定蚯蚓体内4种CYP同工酶活力及其应用
文献摘要：
基于探针底物法,将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素(50μmol·L-1)、安非他酮(25μmol·L-1)、阿莫地喹(50μmol·L-1)、右美沙芬(5μmol·L-1)的孵育体系中(微粒体蛋白质量浓度需控制在32～96 mg·L-1内),于37℃孵育20 min后,加入甲醇终止反应,静置10 min后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量.根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8及CYP2D6酶活力.采用Acquity UPLC HSS T3柱作为分离柱,以不同体积比的含1 mmol·L-1乙酸铵的0.05％(φ)甲酸溶液和甲醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱,串联质谱中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式检测,并用基质匹配法配制混合标准溶液系列.结果显示:7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的质量浓度均在2.5～50μg·L-1内与其对应的峰面积呈线性关系;对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为73.7％～103％,日内相对标准偏差(RSDs,n=5)为2.1％～11％,日间RSDs(n=5)为4.6％～10％.方法用于分析分别暴露于多壁碳纳米管染毒土壤(暴露组)和普通土壤(对照组)21 d后蚯蚓体内4种CYP同工酶的活力,CYP2C8酶活力明显高于CYP2A6、CYP2B6及CYP2D6,暴露组中CYP2A6及CYP2C8酶活力显著(P<0.05)高于对照组,而CYP2B6及CYP2D6酶活力与对照组的无显著性差异,因此推测可将CYP2A6及CYP2C8作为一套生物标记物,用于定性诊断土壤的多壁碳纳米管污染.
文献关键词：
蚯蚓;CYP2A6;CYP2B6;CYP2C8;CYP2D6;探针底物法;高效液相色谱-串联质谱法;土壤污染;多壁碳纳米管
中图分类号：
作者姓名：
张伟;张雪梅;李典晏;余鸿燕;曾婷婷;杨晓霞
作者机构：
重庆市农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所,重庆 401329
文献出处：
引用格式：
[1]张伟;张雪梅;李典晏;余鸿燕;曾婷婷;杨晓霞-.基于探针底物法的高效液相色谱-串联质谱法测定蚯蚓体内4种CYP同工酶活力及其应用)[J].理化检验-化学分册,2022(02):125-132
A类：
探针底物法,阿莫地喹
B类：
串联质谱法,蚯蚓,同工酶,酶活力,微粒体,悬浮液,香豆素,安非他酮,右美沙芬,孵育,静置,滤膜,代谢物,乙基,生成量,CYP2A6,CYP2B6,CYP2C8,CYP2D6,Acquity,UPLC,HSS,不同体积,体积比,乙酸铵,酸溶液,混合溶液,流动相,梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测模式,模式检测,匹配法,混合标准溶液,峰面积,浓度水平,加标回收,回收试验,相对标准偏差,RSDs,日间,多壁碳纳米管,染毒,毒土,暴露组,生物标记物,定性诊断,土壤污染
AB值：
0.254289
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