典型文献
六种水稻病毒一步法多重RT-PCR快速检测方法的建立
文献摘要：
农业生产上水稻(Oryza sativa)病毒病的发生大多为复合侵染,仅通过病毒病症状学的诊断往往很难准确分辨,因此开发快速精准诊断多种水稻病毒病的检测技术,对于水稻病毒病害的精准测报具有重要应用价值.基于此,本研究根据当前我国南方农业生产上常见的6种水稻病毒,即水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)、水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)、水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)、水稻锯齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)、水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的外壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列,设计了特异性检测引物,建立了可同时检测6种病毒的一步法多重逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其结果表明一步法多重RT-PCR检测反应体系(总体系20μL)中,RSV上下游引物浓度为10μmol/L的体积加量为0.6μL、RDV为0.4μL、RGSV为0.3μL、RRSV为0.4μL、RBSDV为0.6μL、SRBSDV为0.2μL;Onestep RT/Taq Mix的用量确认为0.75μL,5×反应缓冲液用量为4μL,模板量为1μg.多重RT-PCR参数设定为RNA反转录50℃30 min;预变性94℃2 min;94℃变性30 s;退火温度58℃,30 s;72℃延伸1 min,35个循环;72℃终延伸10 min.研究结果表明该体系可同时高效精准地检测6种水稻病毒,极大地提高了检测效率;该方法可广泛应用于实验室精准检测、田间水稻病毒病和传毒介体的检测,也为相关产品的研发提供技术支持和参考依据.
文献关键词：
水稻病毒;多重RT-PCR;病毒检测
中图分类号：
作者姓名：
黄静;王晨一;兰彬源;丁新伦;张帅;吴建国
作者机构：
漳州职业技术学院食品工程学院,漳州363000;福建农林大学媒介病毒研究中心,福州350002
文献出处：
引用格式：
[1]黄静;王晨一;兰彬源;丁新伦;张帅;吴建国-.六种水稻病毒一步法多重RT-PCR快速检测方法的建立)[J].农业生物技术学报,2022(04):619-627
A类：
水稻草状矮化病毒,grassy,RGSV,ragged,RRSV,水稻黑条矮缩病毒,streaked,RBSDV,SRBSDV,Onestep
B类：
六种,一步法,快速检测方法,上水,Oryza,sativa,复合侵染,病症状,症状学,精准诊断,水稻病毒病,测报,重要应用,究根,条纹病,Rice,stripe,virus,stunt,dwarf,RDV,水稻锯齿叶矮缩病毒,black,南方水稻,Southern,rice,外壳蛋白,coat,protein,CP,基因序列,特异性检测,引物,同时检测,逆转录,reverse,transcription,测反,反应体系,上下游,Taq,Mix,缓冲液,参数设定,退火温度,极大地提高,检测效率,精准检测,田间,传毒,介体,病毒检测
AB值：
0.296906
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